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SDS-PAGE电泳蛋白样品制备及上样

来源:纷纭教育


包涵体裂解超声:

盐酸胍裂解液:

Stock solutionA(10x)

13.8 g NaH2PO4

146.45g NaCl

500ml水

Stock solutionB(10x)

14.2g NaH2PO4

146.45g NaCl

500ml水

Lysis buffer(100ml pH7.8)

Stock solutionA 0.58ml

Stock solutionB 9.42ml

盐酸胍 57.3g

将收集好的菌用PBS洗2次,接着加入盐酸胍裂解液重悬收集的细胞沉淀,冰浴超声裂解(工作10 s,间歇10 s,全程时间10 s,300 W);8 000 r/20 min离心,上清液清亮。1,2,3,4,5,6,,10号抗原是包涵体,分别用2 mol/L,4 mol/L,尿素各洗一次,一般溶解后4度在摇床上摇20min在离心1500g 30min收集沉淀,洗掉少许杂蛋白,收集相应的沉淀,最后用8M尿素溶解然后留上清,用SDS—PAGE鉴定分子量及纯度。8,14号抗原不是包涵体,超声离心后直接收上清,用盐酸胍裂解液溶解后直接SDS—PAGE鉴定。

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