一种用于规模化生产的草莓脱毒快繁的组培方法[发明专利]

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 CN 105594596 A (43)申请公布日 2016.05.25

(21)申请号 201610020838.6(22)申请日 2016.01.13

(71)申请人石磊

地址2000 山东省烟台市莱阳市五龙南路

53号(72)发明人石磊 贺石 沙逢源 贺红

陈海华 王建化 陈永清(51)Int.Cl.

A01H 4/00(2006.01)

权利要求书1页 说明书3页

(54)发明名称

一种用于规模化生产的草莓脱毒快繁的组培方法(57)摘要

本发明是有关于一种用于规模化生产的草莓脱毒快繁的组培方法，包括以下步骤：(A)材料的选择及初代培养：选用健壮的匍匐茎，在超净工作台上用75％的酒精表面消毒0.5min，再用3％的次氯酸钠消毒10min，无菌水冲洗三次，切取1cm茎尖，接种于初代诱导培养基上；(B)茎尖脱毒：半个月后，将匍匐茎获得的茎尖组培苗置于36℃培养10天，进行第一次脱毒，继续接种于初代诱导培养基中培养，二个月后，重复脱毒一次；(C)继代增殖培养：然后再将长出的组培苗转瓶于继代培养基进行增殖培养；(D)生根培养：当苗长至4－5cm后，转瓶于生根培养基，培养15天左右，根长到4－5条，炼苗3天，种于50孔穴盘，2个月后，脱毒草莓苗可移植于大田繁殖。 C N 1 0 5 5 9 4 5 9 6 ACN 105594596 A

权　利　要　求　书

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1.一种用于规模化生产的草莓脱毒快繁的组培方法，其特征在于，包括以下步骤：(A)材料的选择及初代培养：选用健壮的匍匐茎，在超净工作台上用75％的酒精表面消毒0.5min，再用3％的次氯酸钠消毒10min，无菌水冲洗三次，切取1cm茎尖，接种于初代诱导培养基上；

(B)茎尖脱毒：半个月后，将匍匐茎获得的茎尖组培苗置于36℃培养10天，进行第一次脱毒，继续接种于初代诱导培养基中培养，二个月后，重复脱毒一次；

(C)继代增殖培养：然后再将长出的组培苗转瓶于继代培养基进行增殖培养；(D)生根培养：当苗长至4－5cm后，转瓶于生根培养基，培养15天左右，根长到4－5条，炼苗3天，种于50孔穴盘，2个月后，脱毒草莓苗可移植于大田繁殖。

培养环境：除茎尖脱毒阶段，其余培养环境均为光照强度控制在2000－3000LX，温度控制在20－25℃。

2.根据权利要求1所述的用于规模化生产的草莓脱毒快繁的组培方法，其特征在于，所述的初代诱导培养基为：改良MSH培养基+2mg/L BA+0.1mg/L IBA+蔗糖30g/L+琼脂6g/L+蒸馏水，PH5.8；

所述的继代培养基为改良MSH培养基+0.3mg/L BA+0.1mg/L IBA+食用白糖30g/L+琼脂6g/L，PH5.8；

所述的生根培养基为：1/2改良MSH培养基+0.5mg/L IBA+食用白糖20g/L+琼脂6g/L，PH5.8。

3.根据权利要求2所述的用于规模化生产的草莓脱毒快繁的组培方法，其特征在于，所述的改良MSH培养基包括MS大量元素和微量元素、有机物21金维他和铁盐。

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说　明　书

一种用于规模化生产的草莓脱毒快繁的组培方法

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技术领域

[0001]本发明涉及草莓的加工培养领域，特别是涉及一种用于规模化生产的草莓脱毒快繁的组培方法。

背景技术

[0002]草莓是蔷薇科草莓属多年生草本植物，属于多倍体植物。草莓果实为小浆果，鲜艳亮丽，柔软多汁，酸甜适中，芳香浓郁，是世界上七大水果之一。山东莱阳地区作为胶东第一大农产品出口创汇城市，草莓深受青睐，近年来发展很快，栽培面积也不断扩大，但用做栽培的草莓苗都是无性繁殖，并随着病毒侵染面积逐年扩大，严重降低了草莓的产量和品质。据报道，草莓被一种病毒、隐病毒侵染，产量可下降21～35％，两种以上病毒复合侵染，产量会下降43～59％，而且果实少、品质差，酸度增加，含糖量降低。用化学药物对病毒病进行防治效果甚微，故生产上多采用无病毒种苗来控制病毒病的蔓延。茎尖脱毒组培是获得无病毒植株的重要途径之一。[0003]目前，草莓苗脱毒主要流程：采用MS培养基，选取田间健壮株匍匐茎尖，清洗杀菌消毒，在超净工作台解剖镜下剥离茎尖，接入接种培养基培养，经继代增殖培养，瓶内生根，然后移植营养钵培育原原种苗，田间扩繁原种苗，田间扩繁良种苗，最后用于大田生产。为了种苗脱毒更彻底，部分研究人员利用高温结合二次脱毒。[0004]在此过程中，我们发现，配置的营养剂母液用了一段时间后，出现了絮状沉淀。为了不影响脱毒苗繁殖，只得倒掉，重配；另一方面，从田间或温室采取的匍匐茎材料，在显微镜下茎尖剥离后，因为材料太小，约0.3mm，接种到培养基上后，很快褐化死亡，即使添加Vc抗氧化剂也是如此。

[0005]鉴于以上情况，我们对草莓的培养流程做了一些改进，以期为种苗脱毒工艺提供有益参考，提高脱毒效率，降低生产成本，满足规模化快繁生产要求。发明内容

[0006]本发明的目的是要提供一种用于规模化生产的草莓脱毒快繁的组培方法，使其可提高草莓的脱毒效率、提高母液的利用率，节约成本，可规模化生产。[0007]为解决上述问题，本发明提供一种用于规模化生产的草莓脱毒快繁的组培方法，包括以下步骤：

[0008](A)材料的选择及初代培养：选用健壮的匍匐茎，在超净工作台上用75％的酒精表面消毒0.5min，再用3％的次氯酸钠消毒10min，无菌水冲洗三次，切取1cm茎尖，接种于初代诱导培养基上；

[0009](B)茎尖脱毒：半个月后，将匍匐茎获得的茎尖组培苗置于36℃培养10天，进行第一次脱毒，继续接种于初代诱导培养基中培养，二个月后，重复脱毒一次；[0010](C)继代增殖培养：然后再将长出的组培苗转瓶于继代培养基进行增殖培养；[0011](D)生根培养：当苗长至4－5cm后，转瓶于生根培养基，培养15天左右，根长到4－5

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条，炼苗3天，种于50孔穴盘，2个月后，脱毒草莓苗可移植于大田繁殖。[0012]培养环境：除茎尖脱毒阶段，其余培养环境均为光照强度控制在2000－3000LX，温度控制在20－25℃。[0013]进一步的，所述的初代诱导培养基为：改良MSH培养基+2mg/L BA0.1mg/L IBA+蔗糖30g/L+琼脂6g/L+蒸馏水，PH5.8；

[0014]所述的继代培养基为改良MSH培养基+0.3mg/L BA+0.1mg/L IBA+食用白糖30g/L+琼脂6g/L，PH5.8；

[0015]所述的生根培养基为：1/2改良MSH培养基+0.5mg/L IBA+食用白糖20g/L+琼脂6g/L，PH5.8。

[0016]进一步的，所述的改良MSH培养基包括MS大量元素和微量元素、有机物21金维他和铁盐。

[0017]采用这样的设计后，本发明至少具有以下优点：[0018]经过改进后的草莓种苗脱毒工艺，不仅可以使培养基的制作更为简单，而且不存在母液沉淀问题，同时增加了培养基营养成分，更有利于繁殖材料的增殖；而且减少了材料的褐化，在不添加任何抗氧化剂的情况下，材料的褐化率也降低了。[0019]本发明方法在操作方法、生产成本等方面都明显优于以往的组培脱毒快繁，所建立的规模化商品生产体系稳定、周期较短，能够满足规模化脱毒快繁生产。具体实施方式

[0020]本发明提供一种用于规模化生产的草莓脱毒快繁的组培方法，包括以下步骤：[0021](A)材料的选择及初代培养：：选用健壮的匍匐茎，在超净工作台上用75％的酒精表面消毒0.5min，再用3％的次氯酸钠消毒10min，无菌水冲洗三次，切取1cm茎尖，接种于启动培养基上；

[0022](B)茎尖脱毒：半个月后，将匍匐茎获得的茎尖组培苗置于36℃培养10天，进行第一次脱毒，接种于初代诱导培养基中继续培养，二个月后，重复脱毒一次；[0023](C)继代增殖培养：然后再将长出的组培苗转瓶于继代培养基进行增殖培养；[0024](D)生根培养：当苗长至4－5cm后，转瓶于生根培养基，培养15天左右，根长到4－5条，炼苗3天，种于50孔穴盘，2个月后，脱毒草莓苗可移植于大田繁殖。[0025]培养环境：除茎尖脱毒阶段，其余培养环境均为光照强度控制在2000－3000LX，温度控制在20－25℃。

[0026]所述的初代诱导培养基为改良MSH培养基+2mg/L BA+0.1mg/L IBA+蔗糖30g/L+琼脂6g/L+蒸馏水，PH5.8；

[0027]所述的继代培养基为改良MSH培养基+0.3mg/L BA+0.1mg/L IBA+食用白糖30g/L+琼脂6g/L，PH5.8；

[0028]所述的生根培养基为：1/2改良MSH培养基+0.5mg/L IBA+食用白糖20g/L+琼脂6g/L，PH5.8。

[0029]所述的改良MSH培养基包括MS大量元素和微量元素、有机物21金维他和铁盐。[0030]我们利用该工艺分别在草莓品种(美13、甜查理、甜宝、卡姆露莎)，红薯品种(徐薯22，、烟薯25、紫薯东风6号、济黑1号)和芋头进行了试验，结果显示所有品种长势明显优于

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以往的培养体系，繁殖系数提高了10％－30％；剥离茎尖过程中，茎尖再没出现过褐化死亡，褐化率为0。

[0031]以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的，本领域技术人员利用上述揭示的技术内容做出些许简单修改、等同变化或修饰，均落在本发明的保护范围内。

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