实验室常用溶液配制。 1. 酸液配方:
K2Cr2O2:100g 加热助溶,冷却后加浓H2SO4。 H2O:750ml H2SO4:275ml
注:切不可将K2Cr2O2倒入H2SO4中,以防爆炸。
2. D-HanK’s g/L NaCl:8g KCl:0.4g
Na2HPO4·H2O:0.06g / Na2HPO4:0.0534g KH2PO4:0.06g NaHCO3:0.35g 酚红:0.02g
3. 4%多聚甲醛
4g多聚甲醛+PBS(细胞培养用)定容至100ml。 配制时65℃水浴不停搅拌。
4. Trypsin (0.25%)
① 0.25g Trypsin 加PBS100ml 0.02g EDTA
② 加适量5%NaHCO3调PH至7.2-7.4
注:用前30min,将其放入37℃培养箱以提高胰酶活性。
5. PI染液配制 NS:32.4ml PI:2.5mg RNase:0.5mg
Triton-X100:0.25ml 枸橼酸钠:50mg 加蒸馏水至50ml
注:配时PI最后加入(因其避光且有剧毒)
6. 动物麻醉剂量(i.p.)
水合氯醛:小鼠5%——0.08ml/10g;大鼠10%——0.3-0.4ml/100g 戊巴比妥钠:小鼠0.3%;大鼠3%——0.15ml/100g;犬——3%(i.v.),1ml/kg 乌拉坦:大鼠25%——0.5ml/100g
7. ADP配制
128mg+173mlH2O
200µl/支分装,-20℃保存
用时NS+800µl或磷酸缓冲液+800µl
8. PAF配制 1mg+NS10ml
分装50µl/支,每支加950µlNS稀释
9. AA配制
无水乙醇(EtOH)500µl,待全溶后加入NS至1ml,分装为20µl/支。 用时加980µlNS稀释至1ml。
终浓度:76.92µg/ml(体内) 74.07µg/ml(体外)
10. 电泳液(buffer)10× Tris 30.3g
Gly 144g 稀释至1000ml备用(可常温保存) SDS 10g
临用前将其用去离子水1:9稀释
11. 转膜buffer 1× Tris 3.03g
Gly 14.4g 加去离子水至1000ml备用(4℃保存备用) MeOH 200ml
10× Tris 30.3g 加去离子水稀释至1000ml备用(4℃保存) Gly 144g
临用时取100ml 10×buffer+150ml MeOH稀释至1000ml (预冷)
12. TBST
Tris: 2.42g
NaCl: 8g 加去离子水至1000ml备用(4℃保存) Tween-20 0.5ml
13. PBS——1000mL NaCl:8g KCl:0.2g
Na2HPO4·H2O:1.56g / Na2HPO4:1.39g / Na2HPO4·12H2O:3.48g KH2PO4:0.2g
PBST: PBS 1000mL+500µL Tween-20
14. 肝素配制
原液:12500u/支(2ml) 抗凝:40u/ml血
配制:2ml 30ml(生理盐水配制) 1.5ml弹头中,100µl-150µl/支。 肝素:全血=1:9 附:
肝素溶液:
取1支含12500u的注射用肝素溶液,用无菌生理盐水稀释25倍,使成为500u/mL,置4℃冰箱保存。将肝素配制成上述浓度的溶液后,分装于试管,每管0.1mL,100℃下烘干,每管能抗凝2mL血液。也可将抽血注射器用配制好的肝素湿润一下,直接抽血至注射器内而使血液不凝。
肝素是一种酸性粘多糖,常用其钠、钾盐,易溶于水,可经高压灭菌(110℃,,3min)。其抗凝作用强,但它可改变蛋白质的等电点,故用盐析法分离蛋白质各部分时,不宜使用肝素。 肝素是常用的全身抗凝剂。动物实验作全身抗凝时,一般剂量为兔10mg/kg,大鼠(2.5-3mg)/(200-300g)体重。若肝素的纯度不高或过期,其剂量应适当增高。 ——《免疫学实验技术》,张文学主编,科学出版社
15. 10%中性
40%甲醛溶液10mL,用PBS稀释到100mL 4℃保存
16. 2.5%戊二醛溶液
25%戊二醛原液用PBS稀释到2.5%浓度
17. 10%SDS
10gSDS+DDW至100ml,充分混匀,常温放置。
18.10%AP(过硫酸铵) 4℃ *过硫酸铵因分解,故应新鲜配制 1gAP+DDW定容至10ml,充分溶解
19.丽春红染液 10× 丽春红S 2.0g
三氯乙酸 30g 加去离子水至100ml,用0.45µm滤膜过滤。 磺基水杨酸 30g 临用时去10ml 10×丽春红染液,用去离子水稀释至100ml。