・１３４・ 第２８卷第２期 ２０１０年４月 实 验 与 检 验 医 学 ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ ＡＮＤ ＬＡＢ０ＲＡＴ０ＲＹ ＭＥＤＩＣＩＮＥ Ｖｏ１．２８ Ｎｏ．２ Ａｐｒ．２０１０ ・论著・ 骨髓干细胞移植对急性缺血性肾损伤大鼠肾小管细胞活性的 影响 王志剑１，谢平ｚ，王共先ｚ，谢安ｚ，娄远蕾２，崔苏萍２，汪泱 （１、南昌大学第一附属医院疼痛科；２、南昌大学泌尿外科研究所，南昌３３０００６） 摘要：目的观察和分析骨髓干细胞ｆＢＭｓｃｓ）移植对大鼠急性缺血性肾损伤后肾小管上皮细胞坏死、变性及增殖的影响。方 法Ｐｅｒｃｏｌｌ密度梯度离心法分离获取ＢＭＳＣｓ。制作大鼠急性缺血性肾损伤模型。通过下腔静脉进行ＢＭ￥Ｃｓ移植。分别于缺血再 灌注后２４ｈ、４８ｈ、７ｄ、１４ｄ获取肾脏标本，ＨＥ染色作肾组织学观察，免疫组织化学染色检测增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达。结 果缺血再灌注后２４ｈ、４８ｈ，ＢＭＳＣｓ移植组肾小管上皮细胞未见坏死及明显变性，而对照组细胞坏死及变性明显；缺血再灌注 后７ｄ、１４ｄ，ＢＭＳＣｓ移植组和对照组肾小管上皮均无细胞坏死．但对照组可见部分细胞胞浆肿胀及间质内少许红细胞；ＢＭＳＣｓ移 植组较对照组肾小管上皮ＰＣＮＡ阳性细胞数增多．组间差异具统计学意义 结论ＢＭＳＣｓ移植可减少急性缺血性肾损伤的肾 小管上皮细胞变性、坏死。而促进肾小管上皮细胞的增殖。 关键词：骨髓干细胞：急性缺血性肾损伤：肾小管上皮细胞 中图分类号Ｒ４５７．７．Ｒ３３２ 文献标识码Ａ 文章编号１６７４—１１２９（２０１０）０２—０１３４—０３ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｉ．ｉｓｓｎ．１６７４—１ １２９．２０１０．０２．０１０ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｒａｍｓｐｌａｎｔｅｄ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｏｎ ｒｅｎａｌ ｔｕｂｕｌａｒ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ａｆｔｅｒ ａｃｕｔ ｌｌ拜ｌ ｌｓ Ｉ｝ｍｉ ｉ 珊 ．ｍ ｒａｔｓ ＷＡＮＧ Ｚｈｑｉａｎ，ＸＩＥ ， ＷＡＮＧ Ｇｏｎｇｘｉａｎ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＰａｉｎ， 口Ｅｉ ｝Ａｆｉｆｌｉａｔｅｄ ｔｔｏｓ— ｐｉｔａｌ ｏｆＮａｎｃｈａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｃｈａｎｇ．￣３ｏｏｏ６，Ｃｈｉｎａ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ（ＢＭＳＣｓ）ｅｌｌ ｒ￣ｎａｌ ｔｕｂｕｌａｒ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ａｆｔｅｒ ａｃｕｔｅ ｒｅｎａｌ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｉｎｉｕｒｙ ｉｎ ＳＤ ｒａｔｓ，Ｍｅｔｂｏｄｓ ＢＭＳＣｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｏ ｆｅ－ ｍａｒｓ ａｎｄ ｔｉｂｉａｅ ｏｆ ｍａｌｅ ＳＤ ｒａｔｓ ｗｉｔｈ Ｐｅｒｃｏｌｌ ｄｅｎｓｉｔｙ ｇｒａｄｉｅｎｔ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ．Ａｌｌ ｍｏｄｅｌ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｓｕｂｊｅｃｔｅｄ ｔｏ ｃｌａｍｐｉｎｇ ｂｉｌａｔｅｒｌａ ｒｅｎａｌ ｐｅｄｉｃｌｅｓ ｆｏｒ ４５ ｍｉｎｕｔｅｓ，ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＢＭＳＣｓ ｏｒ ｓａｌｉｎｅ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｉｎｆｅｒｉｏｒ ｖｅｎａ ｃａｖａ，ａｎｄ ｗｅｒｅ ｓａｃｒｉｉｆｃｅｄ ｔｏ ｃｏｌｌｅｃｔ ｔｈｅ ｋｉｄｎｅｙｓ ａｔ ｌ，２，７，１４ ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ Ａｌｌ ｋｉｄｎｅｙ ｓ鲫 － ｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｂｙ ＨＥ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｕｎｄｅｒ ｌｉｇｈｔ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ． Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔ０ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｅｘａｍｉｎｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓ ｏｆ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇ ｃｅｌｌ ｎｕｃｌｅａｒ ａｎｔｉｇｅｎ（ＰＣＮＡ）．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｎｏ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ａｎｄ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ｔｕｂｕｌａｒ ｃｅｌｌ ｄｅｇｅｎ． ｅｒａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ｋｉｄｎｅｙｓ ｏｆ ｔｒａｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ａｔ ｌ，２ ｄａｙｓ曲ｅｒ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ．Ｃｅｌｌ ｓｗｅｌｌｉｎｇ ａｎｄ ｏｃｃａｓｉｏｎａｌ ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉｕｍ ｗｅｒｅ ｖｉｓｉｂｌｅ ｉｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ａｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｒａｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ａｔ ７，１４ ｄａｙｓ．Ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ＰＣＮＡ—ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｋｉｄｎｅｙ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ ｔｒａｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌ ｒｇｏｕｐ ａｔ ７，１４ ｄａｙｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ ＢＭＳＣｓ ｃａｎ ａｔｔｅｎｕａｔｅ ｎｅｃｒｏｓｉｓ，ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｎａｌ ｔｕｂｕｌｒａ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ａｃｃｅｌｅｒａｔｅ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ａｃｕｔｅ ｒｅｎａｌ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｉｎｊｕｒｙ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ；Ａｃｕｔｅ ｒｅｎａｌ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｊｎｊｕｒｙ；Ｒｅｎａｌ ｔｕｂｕｌｒａ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅＨｓ 肾小管上皮细胞的缺失及功能障碍在缺血性肾 伤后大鼠肾小管细胞坏死、变性及增殖的影响。为 损伤过程中起着关键性作用 ．而有研究证实在缺 ＢＭＳＣｓ移植修复急性缺血性肾损伤探寻实验依据。 血性肾损伤模型中骨髓问充质干细胞能分化为肾小 材料与方法 管细胞ｆ３１。本实验拟观察和分析骨髓干细胞（ｂｏｎｅ １实验动物与分组取ｌ２只健康雄性ＳＤ大鼠作 ｍａｒｒｏｗ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ，ＢＭＳＣｓ）移植对急性缺血性肾损 为外源性ＢＭＳＣｓ供体。４８只健康雌性ＳＤ大鼠作为 国家自然科学基金：３０９６０３８５ 缺血性肾损伤模型动物和外源性ＢＭＳＣｓ移植受体， 作者简介：王志剑，男，江西南昌人，１９７９年２月出生，主治医 随机分为缺血再灌注后２４ｈ、４８ｈ、７ｄ、１４ｄ的移植组 师、讲师。 通讯作者：汪泱，女，江西高安人，研究员，博士生导师，主要 与对照组，每组６只大鼠。所有大鼠均购自南昌大 研究方向为干细胞与再生医学。 学医学院动物科学部 第２８卷第２期 ２０１０年４月 实 验 与 检 验 医 学 ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ ＡＮＤ ＬＡＢ０ＲＡＴＯＲＹ ＭＥＤＩＣＩＮＥ Ｖｏ１．２８ Ｎｏ．２ Ａｐｒ．２０１０ ２主要试剂与仪器Ｐｅｒｃｏｌ１分离液ｆ１．０７３ｇ／Ｌ１， 内仅见少许红细胞。（图１Ａ、Ｂ）缺血再灌注７ｄ和１４ｄ 样本中．移植组与对照组肾小管上皮均无明显的细 Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；ＤＭＥＭ培养基，Ｇｉｂｃ０：小鼠 抗大鼠ＰＣＮＡ单克隆抗体，Ｚｅｍｉｄ；台式离心机。Ｓ ｍａ；光学显微镜，Ｏｌｙｍｐｕｓ。 胞坏死．肾小管轮廓尚完整．但后者仍可见部分细胞 胞浆肿胀及问质内少许红细胞。（图１Ｃ、Ｄ） ３ ＢＭＳＣｓ的获取将供体大鼠以颈椎脱臼法处 死，立即于无菌条件下获取股骨和胫骨．剪去两侧骨 端．用ＤＭＥＭ培养基反复冲洗股骨和胫骨骨腔得到 骨髓组织，离心后收集沉淀物用ＤＭＥＭ培养基重 悬、打匀，轻置于Ｐｅｒｃｏ１１分离液（１．０７３ｇ／Ｌ）上，以 骚潮 ２５００ｒ／ｍｉｎ离心２０ｍｉｎ，取中间相细胞层．调整细胞 密度为１×１０６／Ｌ ４急性缺血性肾损伤模型的制作取健康雌性 ＳＤ大鼠，经腹腔注射（１００ｍｇ／ｋｇ）进行麻醉， 取腹部正中切口，逐层分离腹壁组织．显露并分别游 离双侧肾脏，用无损伤性血管夹夹闭双侧肾蒂 ４５ｍｉｎ。之后松开无损伤性血管夹恢复肾血流灌注． 取ＩｍＩＢＭＳＣｓ悬液（移植组）或等量的生理盐水（对 照组），由下腔静脉注入 ５肾组织取材分别在缺血再灌注２４ｈ、４８ｈ、７ｄ、 １４ｄ后获取大鼠肾脏，用４％甲醛溶液固定２４ｈ，生 物组织自动脱水机中脱水、浸蜡，低熔点（５６℃）石蜡 包埋肾组织块，制作厚度为５１ｘｍ的石蜡切片。 ６ ＨＥ染色及ＰＣＮＡ的检测对各组肾组织石蜡 切片进行苏木素一伊红（ＨＥ）染色，置于光学显微镜 下以不同倍数行病理学观察 应用小鼠抗大鼠ＰＣＮＡ单克隆抗体对缺血再灌 注７ｄ、１４ｄ移植组和对照组肾组织石蜡切片进行免 疫组织化学染色．每张切片均于ｘ４０倍镜下随机选 择１０个视野计数阳性细胞．取其平均值用于统计学 分析。 ７统计学处理各组数据用均数±标准差（ｘ一４－－ｓ）表 示 先进行方差齐性检验．再行两样本的Ｓｔｕ— ｄｅｎｔ ｓ ｔ检验或 检验 Ｐ＜０．０５时．认为组问差异具 有统计学意义 结果 １肾组织的病理变化 缺血再灌注２４ｈ和４８ｈ样本中．对照组肾小管 上皮细胞出现核溶解、碎裂，细胞脱落以及明显的脂 肪或空泡样变性，基底膜裸露或不完整，肾小管管腔 变窄甚至堵塞．间质内大量红细胞：移植组肾小管上 皮细胞未见细胞核固缩、碎裂和溶解等细胞坏死征 象．也无明显细胞变性征象，肾小管轮廓清晰，基底 膜保留较完整．肾小管管腔中未见管型及堵塞．问质 圈图１肾组织的病理变化 豳 ２肾组织增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达变化 缺血再灌注７ｄ和１４ｄ样本中．移植组与对照组 肾小管各段均可见呈阳性染色的上皮细胞．外髓区、 皮一髓质交界处和皮质区的阳性染色细胞分布无明 显差异，肾小球内少见阳性染色细胞（图２Ａ、Ｂ）。各 组肾小管ＰＣＮＡ阳性细胞计数结果如图３所示．移 植组ＰＣＮＡ阳性细胞计数多于对照组．其组间差异 具统计学意义 图２ 肾组织增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达 １０ 皂 ９ ８ ７ ６ ．宝 ５ —ＢＭＳＣｓ 毒 ４ 口ｓａｌｉｎｅ 吕 ３ ７ｄ 图３缺血再灌注后７ｄ．１４ｄ各组肾组织中ＰＣＮＡ阳性 细胞计数结果 讨论 肾缺血性损伤后的修复需要对所缺失的或受损 伤的肾小管上皮细胞以再生或替代，肾小管的修复 程度依赖于对损伤的和／或死亡的上皮细胞的替代 情况 ．这就需要某些细胞进入细胞周期而生 ・Ｉ３６・ 第２８卷第２期 ２０１０年４月 实 验 与 检 验 医 学 ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ ＡＮＤ ＩＡＢ０ＲＡＴ０ＲＹ ＭＥＤＩＣＩＮＥ Ｖｏ１．２８ Ｎｏ．２ Ａｐｒ．２０１０ 成新的上皮细胞．进而扩散或迁移到发生了细胞脱 落的基底膜处，以重建肾小管的结构并恢复其功能。 本实验发现缺血再灌注后２４ｈ、４８ｈ。ＢＭＳＣｓ移 植组肾小管上皮细胞未见坏死及明显变性．而对照 组细胞坏死及变性明显 可见．ＢＭＳＣｓ移植减少了 急性缺血性肾损伤早期肾小管上皮细胞的坏死和变 性。 ＰＣＮＡ是评价细胞增殖状态的一个较为成熟的 织细胞［６１：在缺血性肾损伤模型中骨髓间充质干细 胞能分化为肾小管细胞【３】 我们已往的实验发现荧 光标记的ＢＭＳＣｓ能够迁移、定居于缺血再灌注损伤 后的肾组织中并分化为肾小管上皮细胞［７１。综合以 上．我们认为本实验中缺血性肾损伤后肾小管上皮 细胞坏死、变性的减少以及细胞增殖的加强可能归 功于部分移植的ＢＭＳＣｓ向肾小管上皮的转化及其 自身的增殖．也可能在于ＢＭＳＣｓ所产生的各种生长 指标。免疫组织化学染色显示，缺血再灌注后７ｄ、 因子和营养因子的生物学作用 １４ｄ．各组肾小管均可见细胞核染成棕黑色的ＰＣＮＡ 参考文献 阳性细胞．ＨＥ染色提示各组肾小管上皮均无细胞 …１ Ｔｈａｄｈａｎｉ Ｒ，Ｐａｓｃｕａｌ Ｍ，Ｂｏｎｖｅｎｔｒｅ ＪＶ．Ａｃｕｔｅ ｒｅｎａｌ ｆａｉｌｕｒｅｍ．Ｎ 坏死．仅对照组部分细胞胞浆肿胀及间质内出血征 Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ，１９９６，３３４：１４４８—１４６０． ［２］Ｌｉｅｂｅｒｔｈａｌ Ｗ，Ｎｉｇａｍ ＳＫ．Ａｃｕｔｅ ｒｅｎａｌ ｆａｉｌｕｒｅ．１Ｉ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ 象 说明无论是否进行了ＢＭＳＣｓ移植．肾脏在缺血 ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｒｅｎａｌ ｆａｉｌｕｒｅ：ｉｍｐｅｒｆｅｃｔ ｂｕｔ ｉｎｄｉｓｐｅｎｓａｂｌｅ们．Ａｍ Ｊ 性损伤后均出现了细胞增殖以进行修复。但是．移 Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｒｅｎｏｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ，２０００，２７８：Ｆ１一Ｆ１２． 植组的细胞增殖程度高于对照组．对照组仍有部分 【３］Ｋａｌｅ Ｓ，Ｋａｒｉｈａｌｏｏ Ａ，Ｃｌａｒｋ ＰＲ，ｅｔ ａ１．Ｂｏｎｅ ｍａｌＴＯＷ ｓｔｅｍ ｃｅＵｓ ｃｏｎ－ 细胞变性．提示ＢＭＳＣｓ移植可以增进缺血性损伤后 ｔｒｉｂｕｔｅ ｔｏ ｒｅｐａｉｒ ｏｆ ｔｈｅ ｉｓｃｈｅｍｉｅａｌｌｙ ｉｎｊｕｒｅｄ ｒｅｎａｌ ｔｕｂｕｌｅ［Ｊ］．Ｊ Ｃｌｉｎ 肾小管细胞的增殖．更有助于缺血性损伤后肾小管 Ｉｎｖｅｓｔ，２００３，ｌ １２（１）：４２－４９． 结构完整性的维持与修复 【４】Ｍｏｒｉｇｉ Ｍ，Ｉｍｂｅｒｔｉ Ｂ，Ｚｏｊａ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｅｅＨｓ ａｒｅ ｒｅｎｏｔｒｏｐｉｃ．ｈｅｌｐｉｎｇ ｔｏ ｒｅｐａｉｒ ｔｈｅ ｋｉｄｎｅｙ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ａ－ 本实验经下腔静脉移植的ＢＭＳＣｓ为混合干细 ｃｕｔｅ ｒｅｎａｌ ｆａｉｌｕｒｅ［Ｊ］．Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ，２００４，１５：１７９４－１８０４． 胞．包含了间充质干细胞和造血干细胞等类型。体 ［５］Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ Ｋ，Ｎａｋａｍｕｒａ Ｔ．Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ：．ｅｒｎｏｔｅｒｐｉｅ ｒｏｌｅ 外研究显示．骨髓间充质干细胞能够产生肝细胞生 ａｎｄ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ｆｏｒ ｒｅｎａｌ ｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｊ］．Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ，２００１，５９： 长因子和成骨蛋白等物质．可以促进肾小管上皮细 ２０２３—２０３８． 胞的有丝．抗细胞凋亡和增进细胞成形活性［５１ ［６］Ｌｉｎ Ｆ，Ｃｏｒｄｅｓ Ｋ，Ｌｉ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｎｓ ｃｏｎｔｉｒｂｕｔｅ ｔｏ ｔｈｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｎａｌ ｔｕｂｕｌｅｓ ａｆｔｅｒ ｒｅｎａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎ— 另有研究表明，在缺血再灌注肾损伤模型小鼠中。移 ｊｕｒｙ ｉｎ ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ，２００３，１４：１ １８８－１ １９９． 植的造血干细胞可以在肾组织中定居．分化为肾组 ［７］王共先，汪泱，张中华，等．骨髓间充质干细胞移植对缺血再灌注 肾损伤的保护作用［ＪＪ．中华泌尿外科杂志，２００５，２６（８）：５３５—５３８． （上接第１ １３￣）ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ，ｔｏｂａｃｃｏ ｕｓｅ，ａｎｄ ｔｏｂａｃｃｏ ｃｏｎｔｒｏｌ［Ｊ］．Ｎａｔｌ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｇａｓｔｉｒｃ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓＬ玎．Ｚｈｏｎｇｈｕａ Ｗｅｉ Ｃｈａｎｇ Ｃａｎｅｅｄｎｓｔ，２００８，３１００（２３）：１６７２—９４． Ｗａｉ Ｋｅ Ｚａ Ｚｈｉ，２００９，１２（５）：４９４－４９７． 【２】Ｊｏｎｅｓ ＰＬ，Ｖｅｅｎｓｔｒａ ＧＪ，Ｗａｄｅ ＰＡ，ｅｔ ａ１．Ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ ＤＮＡ ａｎｄ ［８］Ｐｌａｔｔａ ＣＳ，Ｇｒｅｅｕｂｌａｔｔ ＤＹ，Ｋｕｎｎｉｍａｌａｉｙａａｎ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ＨＤＡＣ ｉｎ・ ＭｅＣＰ２ ｒｅｃｒｕｉｔ ｈｉｓｔｏｎｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ ｔｏ ｒｅｐｒｅｓｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ叨．Ｎａｔ ｈｉｂｉｔｏｒ ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ Ａ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ Ｇｅｌ，９９８，１９（２）：１８７—１９１． ｆＪ］．Ｊ Ｓｕｒｇ Ｒｅｓ，２００７，１４２（２）：２１９－２６． 【３］Ｓｕｌｅｗｓｋａ Ａ，Ｎｉｌｄｉｎｓｋａ Ｗ，Ｋｏｚｌｏｗｓｋｉ Ｍ，ｅｔ ａ１．ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｉｎ ［９】Ａｇｒａｗａｌ Ｎ，Ｄａｓａｒａｄｈｉ ＰＶ，Ｍｏｈｍｍｅｄ Ａ，ｅｔ ａ１．ＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ： ｓｔａｔｅｓ ｏｆ ｃｅｌｌ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙａｎｄ ｐａｔｈｏｌｏｇｙｆＪ１．Ｆｏｌｉａ Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ Ｃｙｔｎｂｉｏｌ， ｂｉｏｌｏｇｙ，ｍｅｃｈａｎｉｓｍ，ａｎｄ ａｐｐｌｉｅａｔｉｏｎｓ￣］．Ｍｉｃｒｕｂｉｏｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｒｅｖ， ２００７，４５（３）：１４９－１５８． ２００３，６７㈤：６５７－６８５． 【４】Ｏｙｅｒ ＪＡ，Ａｂｅｒｒａｎｔ ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｅ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ｉｓ ｔｉｒｇｇｅｒｅｄ ｂｙ ａ ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｒｅ— ［１０］Ｙａｓｕｈｉｒｏ Ｔ，Ｒｏｍｕｌｏ ＭＢ，Ｓｊｏｒｕ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｅ Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｇｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２００９，４（３）：ｅ４８３２． Ｔｕｍｏｒ Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ＣＣＡＡＴ／Ｅｎｈａｎｅｅｒ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ 【５】Ｍｕｎｔｅａｎ ＡＧ，Ｈｅｓｓ ＪＬ，Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ ｄｙｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅ￣Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，２００６，９８（６）： Ｐａｔｈｏｌ，２００９，１７５（４）：１３５３－１３６１． ３９６－４０６． ［６１ Ｍｉｒｅｍａｄｉ Ａ，Ｏｅｓｔｅｒｇａａｒｄ Ｍ Ｚ，Ｐｈａｒｏａｈ Ｐ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｃａｎｃｅｒ ｇｅｎｔｉｃｓ ｏｆ 【１ １】Ｂａｌａｚｓ Ｈａｌｍｏｓ，Ｃｌａｕｄｉａ Ｓ．Ｈｕｅｔｔｎｅｒ，Ｏｌｉｖｉｅｒ Ｋｏｃｈｅｒ，ｅｔ ａ１．Ｄｏｗｎ－ ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｅ ｇｅｎｅｓ【Ｊ］．ｂＨｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ，ｂ２００７，１６（１）：Ｒ２８一Ｒ４９． Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｃ／ＥＢＰａ ｉｎ Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ叨． 【７】Ｍｅｎｇ ＣＦ，Ｚｈｕ ＸＪ，Ｄａｉ ＤＱ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ５－Ａｚａ－２ －ｄｅｏｘｙｃｙｔｉ— Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２００２，６２（２）：５２８—５３４． ｄｉｎｅ ａｎｄ ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ Ａ ｏｎ Ｐ１６，ｈＭＬＨ１ ａｎｄ ＭＧＭＴ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ＤＮＡ
