酶联免疫吸附测定实验报告
ELISA
一实验原理
酶联免疫吸附测定
(enzyme-linked immunosorbent assay，简称 ELISA)是在免疫酶技术
ELISA过程包
(immunoenzymatic techniques) 的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。
括：抗原 (抗体 )吸附在固相载体上——包被，加待测抗体
(抗原 )，加相应酶标记抗体 (抗原 )，
生成抗原 (抗体 )-待测抗体 (抗原 )-酶标记抗体的复合物，在于该酶的底物反应生成有色产物。
然后借助分光光度计的光吸收计算抗体 比。
ELISA常用的有
(抗原 )的量。待测抗体 (抗原 )的定量与有色产生成正
4 种方法，分别是直接法、间接法、双抗体夹心法和竞争法。在我们的
实验中，采用的是间接法。主要步骤有：将抗原吸附于固相载体表面；加抗体，形成抗原抗体复合物；加酶标抗体；加底物 (测定底物的降解量 =抗体量 )。
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二实验用品及器具
1 聚苯乙烯微量细胞培养板 2 酶联免疫检测仪
(平板， 96 孔)
3 辣根过氧化物酶羊抗兔 IgG 4 包被液
0.05mol/L 碳酸缓冲液 (pH 9.6) Na2CO3 NaHCO3
0.15g 0.293g
蒸馏水稀释至 100mL 5 稀释液 (PBS-Tween)
NaCl KCl KH2PO4
8g 0.2g
0.2g
Na2HPO4 · 10H2O
6 Tween-20,0.5mL
2.9g
蒸馏水加至 1000mL
7 洗涤液：同稀释液
8 封闭液：质量分数为 0.5%的 BSA(用 PBS配制 )
9 邻苯二胺溶液 (底物 )
配置： 0.1mol/L 柠檬酸 (2.1g/100ml) ，取 6.1ml
0.2mol/L Na 2HPO4· 12H2O(7.163g/100ml) ，取 6.4ml 加蒸馏水 12.5ml
取邻苯二胺 8mg( 溶解 )
临用前加 30%(体积分数 )H2O240μ L 10 终止液： 2mol/L H 2SO4
三实验步骤
1 在培养板的 B2-B10、 C2-C10、D2-D10 号的 well 中分别加入 0.025mg/ml 的含 Human IgG 的包被液各 200μ L，在 37℃的环境中存放 30min
2 取出培养板，将包被液倒出，用 PBS-T洗涤三次，每次每格 200μ L
3 洗涤之后加入含 0.5%BSA的 PBS(封闭液 )，每格 200μ L，在 37℃的环境中存放 4 取出培养板，将封闭液倒出，用
PBS-T洗涤三次，每次每格 200μ L
30mim
5 将浓度为 1:400 的 Rabbit-α -human IgG antiserum 溶液 (一抗 )稀释为浓度为 1:800、1:1600 、 1:3200 、1:00 、1:12800 、 1:25600 、1:51200 的溶液，一次加入 B2-B9、 C2-C9、 D2-D9，每 格 200μ L，在 B11、C11、 D11 中加入 1:400 的溶液 200μ L，在 37℃的环境中存放 6 取出培养板，将溶液倒出，用
1h
PBS-T洗涤三次，每次每格 200μ L
7 在 B2-B11、C2-C11、D2-D11中分别加入 Goat-α -rabbit IgG-HRP(浓度为 1:20000) 溶液 (二抗 )，
每格 200μ L，在 37℃的环境中存放 30min
8 取出培养板，将溶液倒出，用
PBS-T洗涤三次，每次每格
200μ L
9 每格加入 200μ L 邻苯二胺溶液进行反应，约
5min 后加入终止液 (2mol/L 的 H2SO4 溶液 )
10 将培养板放入酶联免疫检测仪内进行分析，得出数据
四实验数据
内含溶液说明
Well 1
Well 2 Well 3
Average
(the green numbers are
not used)
2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
1:400 1:800 1:1600 1:3200 1:00 1:12800 1:25600 1:51200
No first Antibody
No Antigen
0.608 0.369 0.498 0.458 0.363 0.276 0.206 0.14 0.019 0.182
0.591 0.574 0.5 0.398 0.332 0.274 0.182 0.125 0.015 0.175
0.446 0.476 0.45 0.374 0.403 0.29 0.219 0.141 0.019 0.182
0.5995 0.525 0.482667
0.41 0.366 0.28 0.202333 0.135333 0.017667 0.179667
数据图表如下 :(从图表中可以看出，在 性变化的 )
1:400 到 1:51200 浓度的范围内，数据基本上是呈线
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
由图线可知， 在误差范围内， 吸光度与被检血清浓度接近正比关系。
×光径×浓度”是吻合的。
这与公式：“吸光度
= e
五实验后感想
这是我进入大学以来真正意义上的第一个实验， 虽然整个实验的过程可以说有些枯燥乏味，因为大部分的时间都在等待中度过， 但是不得不说， 在这次实验中还是收获了不少的东西。
首先，这次实验所涉及的内容是我以前完全没有接触过的。
在中学里学到的知识也许只
能勉强解释一下抗原抗体是什么，
是怎么工作的， 但是在定量检测的这一块却从来没有接触
增长了知识。也许在以后的学习中，
可能 这也
过。所以这一次的实验也算是给自己开了开眼界，
也会用到相关的知识， 毕竟我是学生物医学工程的， 以后难免会遇到一些有关的问题，
算是一次提前学习吧。
其次，相对于其他实验来讲， 像这种类型的实验， 对于每种试剂的量的要求是相当高的，也就是说， 可能只是手轻轻一抖， 整个实验就必须得重新来过， 所以这也是一个对自己的耐心、细心程度的锻炼。
做实验，团队合作是必不可少的，一个人做一个实验，总会出现这样那样的问题， 导致实验失败， 而两人的团队合作， 就会使错误发生的概率降到很低， 从而大大增加了实验的效率。
最后还要感谢辛苦的老师和助教们。 在这次实验中， 让我见识了一位最可爱的生物老师——余老师， 在她不到一个小时的讲解时间里， 都不知道被我们的笑声打断多少次了， 幽默
风趣乐观大概是我能想到的描述余老师最准确的词了。 还有几位不辞辛劳一直在我们四周帮助我们的助教们，谢谢你们，让我有了一次如此精彩的经历。
