一般项目方法学验证方案
表一 原料药检测项目及方法学验证方案
名称
检测项目 方法学验证
起始原料
性状、溶解度、鉴别、比旋度（手 残留溶剂、有关物质、含量 性中心）、干燥失重、炽灼残渣、 残留溶剂、重金属、有关物质、
含量 中间体 性状、有关物质、纯度 有关物质、纯度 API
性状、溶解度、引湿性、熔点、 残留溶剂、粒度、有关物质、含 比旋度（手性中心） 、鉴别、干 量 燥失重或水分、硫酸盐、氯化物、 重金属、炽灼残渣、残留溶剂、 粒度、晶型、有关物质、含量
表二 片剂检测项目及方法学验证方案
名称 检测项目
方法学验证
片剂
性状、鉴别、水分、重量差异、 有关物质、溶出度、含量均匀度、
有关物质、溶出度、含量均匀度、 含量、微生物限度
含量、微生物限度
1
表三 有关物质方法学验证内容
名称
有关物质色谱条件 有关物质方法学验证
HPLC
摸索
起始原料
检测波长的初选、分 分离度、仪器精密度、 不加校正因子的主成 离度、检测波长的确 LOD 、溶液稳定性、空 分自身对照法
定
白干扰
中间体
检测波长的初选、分 分离度、仪器精密度、 面积归一化法
离度、检测波长的确 LOD 、溶液稳定性、空
定
白干扰
API
检测波长的初选、分 分离度、强制降解试验、 不加校正因子的主成 离度、检测波长的确 仪器精密度、 LOD 、溶 分自身对照法 定
液稳定性、空白干扰、 耐用性
分离度、强制降解试验、 加校正因子的主成分
系统适用性、仪器精密 自身对照法
度、LOD、LOQ 、线性、 溶液稳定性、空白干扰、 耐用性
分离度、强制降解试验、 外标法 系统适用性、仪器精密 度、方法精密度、中间 精密度、溶液稳定性、
空白干扰、LOD 、LOQ 、 线性、回收率
2
表四 有关物质色谱条件摸索
名称
检测波长的初选
试验内容
分别取各杂质及供试品加甲醇（或乙腈）溶解 并稀释制成各约含 XXug/ml （一般 10ug/ml） 的溶液，进行 UV 扫描（ 200nm～400nm） 先查文献或各国药典
色谱条件摸索（流动 相、色谱柱的摸索）
分离度
检测波长的确定
分别取各杂质及供试品配成一定浓度，分别进 样。 分离度溶液：配制成含 API 的浓度及各杂质浓 度为 1%（ API 的有关物质测定浓度）（进 6 针） 在流动相条件下进行 UV 扫描
备注
溶剂：能溶解供试品或各杂质的单一溶剂（可 向合成咨询溶剂及供试品或各杂质的溶解情 况）
浓度：吸光度读数以在 0.3～0.7 之间为宜
API 的保留时间一般在 5～ 15min，主峰峰型 好，理论板数 5000 以上。
API 的配制浓度：根据扫描结果 杂质与主峰的分离度应大于 1.5
3
表五 有关物质方法学验证具体内容
试验内容
溶液配制方法
溶液配制份数
进样针数
评定标准
备注
系统适用性
分别取供试品、 各杂质适量， 供试液 1 份
进 6 针
杂质峰峰面积 RSD≤ 2.0 %； 杂质为订入标准中的 加流动相超声溶解，并稀释 保留时间 RSD≤1.0%； 杂质
配制成约含供试品 XXmg/ml 杂质峰的拖尾因子 ≤2.0； 和含杂质各 1%（相当于供试 分离度及理论塔板数应符合质 品浓度 XXmg/ml ）的混合溶 量标准的规定
液作为系统适用性溶液。
方法专属性 1 精密量取流动相
供试液 1 份 每份各 1 针 空白溶剂应无干扰； 精密度 在规定的测试条件下，同一均质供试品，经多次取样进行一系列检测所得结果之间的接近程度（离散程度） 仪器精密度
供试液及自身对照液
自身对照液
1 份
进 6 针 峰面积 RSD≤2.0 % 供试液仪器精密度供试液 1 进6针
峰面积 RSD≤2.0 %；
份
保留时间 RSD≤1.0 %
检测限
供试品或杂质适量，用流动 供试品溶液
1 份
检测限 2 针；
S/N≥ 3 或 2。
研究的所有杂质
相溶解并逐级稀释
定量限
供试品或杂质适量，用流动 供试品溶液 1 份
定量限 6 针； S/N ≥ 10。主成分及杂质峰保留外标法测定的杂质 相溶解并逐级稀释
时间的相对标准差应不大于 2.0%，峰面积的相对标准差应不
大于 5.0%。
溶液稳定性
供试液
供试液 1 份
0、 1、2、4、6 、8、24 主成分的含量变化的绝对值 小时各进 1 针
≤ 2.0%；
杂质含量的绝对值在 ±0.1％以
内，
并不得出现新的大于
报告限度
4
的杂质
峰面积及峰面积的归一化含量
耐用性
供试液
调流动相 pH 变化 ±0.2 1 份供试液和 1 份系统 主峰的拖尾因子不得大于
2.0；
系统适用性溶液
调流动相配比变化 ±5% 适用性溶液，各条件下进 主峰与杂质峰必须达到基线分
柱温 ±5℃（如有柱温） 2 针
离；主峰与杂质峰分离度符合质
不同（批号）色谱柱 量标准；
流速相对值变化 ±20％ 各条件下的峰面积 RSD 符合规
缓冲液中盐的浓度 ±10％
定；
杂质含量的绝对值在
±0.1 ％以
内
方法精密度
供试液
供试液 6份
供试品进 1 针
报告限以上的杂质个数一致， 外 杂质对照品溶液
杂质对照品溶液 1 份
杂质对照品溶液进 3 针
标法计算杂质的含量， RSD 不
得大于 15%。
中间精密度
供试液
供试液 6 份（另一个人员、 不 供试品进 1 针
报告限以上的杂质个数一致， 外 杂质对照品溶液
同仪器、不同时间） 杂质对照品溶液进 6 针
标法计算杂质的含量， 12 个数
杂质对照品溶液 1 份
据 RSD 不得大于 20%。
线性
不同浓度的各杂质对照品溶 至少 5 个浓度（ LOQ ～限度的 各进 2针 相关系数（ R）不得小于 0.9990， 液
150%）
Y 轴截距应在 100% 响应值的 25%以内，响应因子的相对标准
差应不大于 10%。
回收率
供试液
供试液 9 份（三个浓度： 50%、 供试液各进 2 针
各浓度下的平均回收率应在 杂质对照品溶液
限度、 120%各 3 份） 杂质对照品进 6 针
80%-120% （低浓度为定量限， 杂质对照品溶液 1 份
放宽至 70%-130% ），RSD(%) 不
大于 10.0%
强制降解试验
供试液
控制溶液、空白溶液、酸破坏、 各进 1针
空白不干扰降解产物的检出，
碱破坏、光破坏、氧化破坏、
5
热破坏、酸碱空白溶液、氧化
空白溶液
6
