中国乡村医药
血必净注射液对慢性阻塞性肺疾病大鼠血清中炎症因子的影响苏美霞 李明晖
【摘要】 目的 探讨血必净注射液对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠血清中炎症因子的影响。方法 选取健康清洁级雄性大鼠30只，随机分成对照组（采用生理盐水）、模型组（采用烟熏加气管注入脂多糖法致大鼠COPD）、治疗组（采用烟熏加气管注入脂多糖法致大鼠COPD模型+血必净注射液）。在第7天、21天、28天分别取左肺下叶供免疫组化检测p53蛋白、髓系细胞触发受体-1（TREM-1）、表达，右肺下叶供HE染色；用ELISA双抗体夹心法测定各组大鼠血清核转录因子-κB（NF-κB）、presepsin蛋白含量。结果 第7、21、28天，模型组肺组织p53、TREM-1阳性反应逐渐增强，定量表达逐渐增加，第28天呈片块状或粗条索状；而治疗组肺组织p53、TREM-1反应弱阳性，定量表达减低，两组相比有差异。模型组大鼠第7天、21天、28天血清NF-κB、presepsin含量逐渐增高，而治疗组则先升高后降低，且第28天两组大鼠血清NF-κB和presepsin水平之间有差异。结论 血必净注射液可下调大鼠肺组织p53、TREM-1的表达，降低血清NF-κB、presepsin含量，从而减轻COPD肺部炎症的发生。
【关键词】 慢性阻塞性肺疾病；血必净注射液；大鼠；炎症因子
DOI:10.19542/j.cnki.1006-5180.000130
慢性阻塞性肺疾病（COPD）是一种以持续气流受限为特征可防治的疾病，气流受限与气道和肺组织对烟草、烟雾等有害气体或颗粒的慢性炎症反应增强有关。一般认为引起全身性表现是肺内的炎症及其代偿事件导致炎症的溢出。而血必净注射液具有拮抗内毒素、炎性因子、调节免疫反应、改善微环境、保护内皮细胞等作用。本文探讨血必净注射液对COPD治疗作用及细胞因子影响的机制。1 材料与方法
1.1 主要试剂 血必净注射液（天津红日药业股份有限公司），浓缩型兔抗大鼠p53抗体和TREM-1抗体；大鼠p53、NF-κB和presepsin试剂盒；脂多糖200μg/μl。1.2 动物来源及分组 健康清洁级雄性大鼠30只，体重（160±30）g，由温州医科大学实验动物中心提供；随机分为对照组、模型组、治疗组三组，各10只。
1.3 造模方法 模型组和治疗组大鼠第1、15天气道内注入脂多糖0.2ml，第2～28天（除第15天外）关在自制熏烟箱（80cm×60cm×40cm）内每天9：00和16：00各被动吸烟1次，每次点燃10支卷烟，持续45分钟。余下时间常规喂养。治疗组造模后当天开始，连续28天尾静脉予血必净注射液2.5g/kg，每天1次。对照组大鼠第1、15天气道内注入生理盐水0.2ml。
1.4 标本采集 血清采集：在第7、21、28天，用2%戊
作者单位：312000 浙江绍兴市人民医院呼吸内科通信作者：苏美霞，Email:whlmail@163.com
图1 模型组肺组织病理
图片（HE×100）
图2 治疗组肺组织病理
图片（HE×100）
巴比妥钠腹腔内注射麻醉，取腹主动脉近心端断端全血10ml，提取血清-20℃冰箱中备用。于28天取大鼠左肺下叶和右肺下叶肺组织，固定于10%甲醛溶液。
1.5 检测指标及方法 病理观察：HE染色。肺组织p53、TREM-1检测：按免疫组化试剂盒进行，肺组织p53、TREM-1的IHC表达结果用Spot及IPP图像采集分析系统处理，以累积光密度（IOD）值表示p53、TREM-1表达的相对强度。大鼠血清NF-κB、presepsin的测定采用ELISA法。
1.6 统计分析 采用SPSS 13.0统计软件，计量资料以
-±s）表示，多组间比较采用F检验，P＜0.05为差异（χ有统计学意义。2 结果
2.1 肺组织病理变化 第28天，模型组肺泡腔有大量炎性渗出，壁增厚，血管平滑肌增生，肺泡结构破坏（图1）；治疗组肺组织结构部分破坏，肺泡腔少许炎性渗出（图2）。对照组大鼠几乎无肺泡炎发生。
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-±s）表 1 第7、21、28天三组大鼠肺间质p53和TREM-1的IOD值 （χ p53
组 别对照组模型组治疗组
只数 10 10 10
第7天 第21天 第28天 6.4±2.9 6.8±3.1 6.5±1.9 11.7±1.8 14.4±2.1 19.2±1.4 10.2±2.1 12.6±2.2 8.2±2.20.56，＞0.05 0.98，＞0.05 5.23，＜0.01
TREM-1
第7天 第21天 第28天 6.2±1.2 6.1±2.2 6.2±1.2 7.4±1.2 8.8±1.1 12.3±3.2 7.9±1.4 9.3±2.1 7.7±2.20.02，＞0.05 0.85，＞0.05 4.54，＜0.01
F，P -±s）表 2 第7、21、28天三组大鼠血清NF-κΒ和presepsin含量 （pg/ml，χ NF-κB
组 别对照组模型组治疗组
只数 10 10 10
第7d 第21d 第28d 5.3±1.6 5.1±1.3 4.9±1.2 6.3±1.2 10.1±1.1 13.9±1.5 7.8±1.2 10.7±1.0 7.4±1.20.63，＞0.05 0.53，＞0.05 4.82，＜0.01
presepsin
第7d 第21d 第28d 4.7±0.3 4.3±0.4 4.6±0.3 6.1±0.1 9.1±0.2 11.5±0.2 6.9±0.1 10.3±0.6 7.1±0.30.03，＞0.05 0.76，＞0.05 4.21，＜0.01
F，P2.2 肺组织p53、TREM-1的表达 第7、21、28天，模型组肺组织p53、TREM-1阳性反应逐渐增强，定量表达逐渐增加，第28天呈片块状或粗条索状（图3）；而治疗组肺组织p53、TREM-1反应弱阳性，定量表达减低，两组相比有差异（图4）。见表1。
激活肺泡巨噬细胞释放这些炎症因子，加重肺泡炎和肺组织炎症反应，破坏肺组织结构。本实验表明模型组大鼠肺组织TREM-1高表达，而血清NF-κB也较高，说明TREM-1可促进NF-κB的分泌，加重COPD炎症反应。presepsin是sCD14被组织蛋白酶D水解的N端片段构成的亚型。借助Toll样受体-4将内毒素信号下传，激活下游的络氨酸蛋白激酶和丝裂原活化蛋白激酶，引起炎症因子的释放。而p53 mRNA被认为是引起DNA损伤后起重要作用的信号分子。迅速表达增高的p53 mRNA可以某些周期蛋白抑制剂的表达，从而抑制细胞增殖，促进细胞凋亡、坏死[1]。我们可以看到模型组肺组织p53呈
图3 第28天模型组免疫组化p53 DAB×400
图4 第28天治疗组TREM-1 DAB×400
强阳性，肺泡结构破坏较严重。
血必净注射液由红花、赤芍、川芎等中药组成，可拮抗内毒素诱导单核巨噬细胞产生的内源性炎症介质失控释放，抑
2.3 大鼠血清NF-κB和presepsin含量 模型组大鼠第7、21、28天血清NF-κB、presepsin含量逐渐增高，而治疗组则先升高后降低，且第28天两组大鼠血清NF-κB和presepsin水平之间有差异。见表2。3 讨论
髓系细胞触发受体-1（TREM-1）是免疫球蛋白超家族成员中的一员，在炎症反应急性期表达于中性粒细胞、单核-巨噬细胞的表面。当TREM-1与其配体结合后，通过DAP12的免疫受体酪氨酸激活基序传递活化信号，使活化T细胞核因子、核转录因子-κB等转录因子活化，导致细胞分泌促炎因子。而NF-κB是一种具有转录激活功能的蛋白质，参与许多前炎症介质分子转录水平的。这些细胞因子介导肺泡炎和肺组织炎症反应。NF-κB还可
制血小板聚集等作用，对缺血/再灌注引起的全身炎症反应和氧自由基损伤的内皮细胞及凝血功能紊乱都有保护作用[2]。可通过下调髓样细胞受体-1的表达，减少NF-κB释放，从而减轻炎症反应，减轻急性肺损伤[3]。本文结果显示，血必净治疗组肺组织TREM-1蛋白表达呈弱阳性，血清NF-κB和presepsin含量较模型组较低，其肺组织损伤程度较轻，说明血必净可以抑制TREM-1蛋白表达，抑制NF-κB和presepsin分泌，保护肺组织。对不同的原因引起的肺损伤研究也表明，血必净注射液可下调组织中NF-κB的表达，降低NF-κB所诱导的炎症效应[4]。
COPD患者肺内被激活的炎症细胞释放多种能够破坏肺的结构和促进中性粒细胞炎症反应的低水平炎症介质，这
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表 1 两组近期疗效比较 [例（%）]
组 别对照组观察组
例数 23 26
CR 8（34.8）12（46.2）
PR 5（21.7）10（38.5）
SD6（26.1）3（11.5）
PD（17.4）4（ 3.8）1
中医认为本病属于“悬饮”范畴，辨证为阳虚阴盛、本虚标实，治疗多采用攻邪逐水法，扶正培本之力较薄弱。艾迪注射液为中药制剂，主要成分为人参皂苷、黄芪皂苷、刺五加多糖和去甲斑蝥素等，其中人参、黄芪和刺五加可补气健脾，斑蝥具有攻毒破血、软坚散结的作用[1]。现代药理学研究[3]证明，人参皂苷能增强T淋巴细胞和B淋巴细胞的功能，诱导干扰素和IL的合成及分泌，增强LAK细胞和NK细胞的活性，具有诱导肿瘤细胞凋亡和升白细胞的作用；黄芪能提高网状内皮系统和淋巴系统的抗癌活性，能促进IL-2的生成和分泌，增强机体免疫系统对肿瘤细胞的杀伤能力；刺五加多糖有利于增强机体免疫功能，具有抗肿瘤作用；去甲斑蝥素可抑制细胞S期DNA合成，诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤血管新生。中西药联合使用不仅有抗癌作用，还能促使骨髓造血干细胞向粒细胞、单核细胞分化，从而使白细胞增加，增强免疫功能。本文结果显示，观察组总有效率和治疗后KPS评分均明显高于对照组。两组不良反应发生率比较差异无统计学意义，表明艾迪注射液未增加不良反应。
-±s）表 2 两组治疗前后KPS评分比较 （分，χ组 别对照组观察组
例数 23 26
治疗前 71.2±6.7 70.2±6.30.54，＞0.05
治疗后 78.2±4.3 86.9±5.26.33，＜0.01
t，P 4.22，＜0.0110.42，＜0.01
t，P前明显升高，且观察组明显高于对照组，差异有统计学意义。2.3 两组不良反应比较 对照组治疗期间出现不良反应6例（26.1%），其中白细胞下降、胃肠道反应各3例；观察组出现不良反应5例（19.2%），其中白细胞下降3例，胃肠道反应2例。两组不良反应发生率比较差异无统计学。意义（χ2=0.33，P＞0.05）3 讨论
胸腔积液大多数由肺癌引起，其次是乳腺癌、淋巴瘤。胸腔引流术是治疗恶性胸腔积液的有效方法，相较穿刺抽吸，闭式引流操作简单，且具有较高安全性，同时对患者胸壁损伤小，有利于提高患者治疗依从性；且留置导管易于固定，可负压吸引，开闭方便，简单实用。胸腔内化疗可杀灭或抑制患者胸膜上或胸腔内癌细胞。顺铂是胸腔灌注化疗最常用的药物，具有广谱抗肿瘤活性，易透过胸膜屏障，注入胸腔内在胸水中的峰浓度比在血浆中高43～98倍[2]，可直接杀伤胸膜及胸腔积液中的癌细胞，还可以刺激脏层胸膜和壁层胸膜，促进脏层、壁层胸膜的粘连和浆膜层闭锁、固定，从而减少胸水渗出，抑制胸水产生。地塞米松具有抗炎、抗病毒及抗过敏等作用，联合灌注能减轻患者胸腔炎症反应。
综上所述，胸腔闭式引流下艾迪注射液联合顺铂治疗恶性胸腔积液效果较好，能够有效抑制胸腔积液的生成，改善患者生活质量。
参 考 文 献
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明红霞，王永杰. 顺铂联合艾迪腔内注射治疗恶性胸腔积液21例分析[J]. 中国误诊学杂志，2007，7（3）：605.
（收稿：2016-10-09）（发稿编辑：李 静）（上接65页）
些炎症介质加重COPD患者急性发作的频率和死亡率。而血必净注射液可以通过减轻p53蛋白和TREM-1蛋白的表达，抑制NF-κB和presepsin的释放，从而抑制COPD的炎症反应，减轻肺组织破坏程度。
参 考 文 献
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（收稿：2016-03-31）（发稿编辑：薛 芳）图片电子版请登录中国农村卫生协会·中国乡村医药（www.ncwsxh.org/crmp）“读者·作者·编者”栏目67
