淮稻5号化学诱变突变体库的构建与基因快速定位

淮稻５号化学诱变突变体库的构建与基因快速定位

，２，２，２，２

王　迪１，牛　梅３，王　健１，程保山１，李　刚１，徐卫军１，袁彩勇１

（１．江苏徐淮地区淮阴农业科学研究所，江苏淮安２２３００１；２．江苏省环洪泽湖生态农业生物技术重点实验室／淮阴师范学院，江苏淮安２２３３００；

３．农作物基因资源与基因改良国家重大科学工程／中国农业科学院作物科学研究所，北京１０００８１）

　　摘要：淮稻５号是江苏地区粳稻主栽品种之一，该品种具有灌浆速度快、出糙率高、千粒质量高、抗倒能力强、耐低温等特点。但由于缺少适宜的研究材料，淮稻５号中优良农艺性状的机制一直没有得到解析。突变体是研究基因功能最直接、最有效的途径之一，本研究利用Ｎ－甲基－Ｎ－亚硝脲（ＭＮＵ）化学诱变构建了包含３５６２个家系的淮稻５号突变体库，并从中筛选获得了５１２个表型稳定的突变体，包括株型、叶色、育性、抽穗期、早衰、类病斑等８种类型，利用ＭｕｔＭａｐ技术完成了２个株型突变体的突变位点初步定位，该突变体库的构建及ＭｕｔＭａｐ技术的应用，以期为淮稻５号优良性状的解析提供突变体资源。　　关键词：淮稻５号；ＭＮＵ；突变体库；ＭｕｔＭａｐ

　　中图分类号：Ｓ５１１．０３２　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０２１）０４－００２６－０６

　　突变体和相对应的突变基因之间有直接的因果关系，对于基因功能的研究最具说服力，因此突变体是研究基因功能最直接、最有效的途径之

１－２］

一［。但自然发生突变的频率极低，高等生物的

－１０－５

自发突变率为１×１０～１×１０，因此通过诱变方

法获得大量的突变体材料，构建水稻突变体库，识别与鉴定突变性状的变异基因，进而明确其功能，

３－５］

。目前构是水稻功能基因组学研究的重要途径［

建突变体的方法主要有插入突变、基因编辑、物理

收稿日期：２０２０－１０－２３

基金项目：江苏省自然科学基金青年基金（编号：ＢＫ２０１９０２２３９）；淮安市农业科学研究院高层次引进人才科研启动发展基金（编号：００６２０１９０１６Ｂ）；淮安市农业科学研究院院长科研基金（编号：ＨＮＹ２０１７０２）；江苏省环洪泽湖生态农业生物技术重点实验室自主研发课题（编号：１７ＨＺＨＬ００９）。

作者简介：王　迪（１９８８—），男，山东昌邑人，博士，助理研究员，主要从事水稻遗传育种研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｄｉｒｉｃｅ＠１６３．ｃｏｍ。

通信作者：袁彩勇，研究员，主要从事水稻遗传育种研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｙｓｄｙｃｙ＠１６３．ｃｏｍ。

６］

诱变和化学诱变等［。

［３，７－８］

插入突变是指将Ｔ－ＤＮＡ、转座子系９－１０］１１－１３］

统［、逆转座子［等ＤＮＡ元件插入植物基因

组中，破坏插入位点内基因的功能，同时ＤＮＡ元件又可作为标签协助从植物基因组中分离出相应基因。基因编辑是一种新兴的比较精确的能对生物体基因组特定目标基因进行修饰的基因工程技术，

ＴＡＬＥＮ）和主要包括转录激活样效应因子核酸酶（

櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｓｉｎｇｌｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ，ＳｎｐＥｆｆ：ＳＮＰｓｉｎｔｈｅｇｅｎｏｍｅｏｆＤｒｏｓｏｐｈｉｌａｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒｓｔｒａｉｎｗ１１１８；ｉｓｏ－；ｉｓｏ－３［Ｊ］．Ｆｌｙ，２０１２，６（２）：８０－９２．２

［１１］ＴｉａｎＴ，ＬｉｕＹ，ＹａｎＨ，ｅｔａｌ．ＡｇｒｉＧＯｖ２．０：ａＧＯａｎａｌｙｓｉｓｔｏｏｌｋｉｔｆｏｒ

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［１２］ＳｔｕｂｅｒＣＷ，ＬｉｎｃｏｌｎＳＥ，ＷｏｌｆｆＤＷ，ｅｔａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｇｅｎｅｔｉｃ

ｆａｃｔｏｒｓｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｎｇｔｏｈｅｔｅｒｏｓｉｓｉｎａｈｙｂｒｉｄｆｒｏｍｔｗｏｅｌｉｔｅｍａｉｚｅ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１９９２，１３２（３）：ｉｎｂｒｅｄｌｉｎｅｓｕｓｉｎｇｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓ８２３－８３９．

［１３］ＬｕＨ，Ｒｏｍｅｒｏ－ＳｅｖｅｒｓｏｎＪ，ＢｅｒｎａｒｄｏＲ．Ｇｅｎｅｔｉｃｂａｓｉｓｏｆｈｅｔｅｒｏｓｉｓ

ｅｘｐｌｏｒｅｄｂｙｓｉｍｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｐｅａｔｍａｒｋｅｒｓｉｎａｒａｎｄｏｍ－ｍａｔｅｄｍａｉｚｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＴｈｅｏｒｅｔｉｃａｌａｎｄＡｐｐｌｉｅｄＧｅｎｅｔｉｃｓ，２００３，１０７（３）：４９４－５０２．

［１４］ＦｒａｓｃａｒｏｌｉＥ，ＣａｎèＭＡ，ＬａｎｄｉＰ，ｅｔａｌ．Ｃｌａｓｓｉｃａｌｇｅｎｅｔｉｃａｎｄ

ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｔｒａｉｔｌｏｃｉａｎａｌｙｓｅｓｏｆｈｅｔｅｒｏｓｉｓｉｎａｍａｉｚｅｈｙｂｒｉｄｂｅｔｗｅｅｎ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００７，１７６（１）：６２５－６４４．ｔｗｏｅｌｉｔｅｉｎｂｒｅｄｌｉｎｅｓ［１５］ＴｈｉｅｍａｎｎＡ，ＦｕＪ，ＳｅｉｆｅｒｔＦ，ｅｔａｌ．Ｇｅｎｏｍｅ－ｗｉｄｅｍｅｔａ－ａｎａｌｙｓｉｓｏｆ

ｍａｉｚｅｈｅｔｅｒｏｓｉｓｒｅｖｅａｌｓｔｈｅｐｏｔｅｎｔｉａｌｒｏｌｅｏｆａｄｄｉｔｉｖｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｔｐｅｒｉｃｅｎｔｒｏｍｅｒｉｃｌｏｃｉ［Ｊ］．ＢＭＣＰｌａｎｔＢｉｏｌｏｇｙ，２０１４，１４：８８．

［１６］ＬｅｄｅｎｔＶ，ＶｅｒｖｏｏｒｔＭ．Ｔｈｅｂａｓｉｃｈｅｌｉｘ－ｌｏｏｐ－ｈｅｌｉｘｐｒｏｔｅｉｎｆａｍｉｌｙ：

ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｇｅｎｏｍｉｃｓａｎｄｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．ＧｅｎｏｍｅＲｅｓｅａｒｃｈ，２００１，１１（５）：７５４－７７０．

［１７］ＶａｒａｇｏｎａＭＪ，ＳｃｈｍｉｄｔＲＪ，ＲａｉｋｈｅｌＮＶ．Ｎｕｃｌｅａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ

（ｓ）ｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒｎｕｃｌｅａｒｔａｒｇｅｔｉｎｇｏｆｔｈｅｍａｉｚｅｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｓｉｇｎａｌｐｒｏｔｅｉｎＯｐａｑｕｅ－２［Ｊ］．ＴｈｅＰｌａｎｔＣｅｌｌ，１９９２，４（１０）：１２１３－１２２７．［１８］刘　欣，李　云．转录因子与植物抗逆性研究进展［Ｊ］．中国农

学通报，２００６，２２（４）：６１－６５．

—２７—

成簇规律间隔短回文重复（ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９）系统等方

１４－１６］

。物理诱变是指通过快中子、质子、法［γ射线、

１　材料与方法１．１　ＭＮＵ诱变

２０１７年正季于江苏徐淮地区淮阴农业科学研究所水稻育种基地选取分蘖较多、生长旺盛的淮稻５号盛花期植株进行ＭＮＵ诱变，当天下午剪除已开花的颖花，第２天下午剪除未开花的颖花同时修剪多余分蘖及叶片，第２天２３：００将预备的穗子浸泡在１ｍｍｏｌ／Ｌ的ＭＮＵ溶液中１ｈ，之后用流水冲洗１５ｍｉｎ，第３天将处理过的植株种植于田间，自交结Ｘ射线等方法处理植物种子，对植物染色体造成损

５，１７］

伤，进而诱发变异［。化学诱变是指利用碱基类

似物、烷化剂、嵌入剂等化学诱变剂处理种子或植

１８］

。与其他方法相比，化学诱变株器官等诱发突变［

具有操作简单、成本较低、受试验条件小、诱变效率高等特点。Ｎ－甲基－Ｎ－亚硝脲（ＭＮＵ）是一种单碱基诱变剂，主要对ＤＮＡ上的鸟嘌呤起烷化作用。Ｓａｔｏｈ等首次确立了利用ＭＮＵ处理水稻受精卵的诱变方法，并指出ＭＮＵ在水稻诱变中的效率高

于甲基磺酸乙酯（

ＥＭＳ）［１９］

。利用物理和化学诱变获得的突变体，如果通过传统图位克隆的办法定位突变基因，存在耗时长、效率低的缺点，极大地了理化诱变突变体库的发展和利用。但随着水稻基因组测序工作的完成以及二代测序技术的不断发展，ＭｕｔＭａｐ技术的出现极大地提高了水稻突变体基因的克隆效率。ＭｕｔＭａｐ技术通过对Ｆ２分离群体中突变表型个体进行混池测序，而后与野生型基因组序列进行比对，进而发现突变基因。同时ＭｕｔＭａｐ技术所需要的Ｆ２分离群体较小，因此减少了杂交工作量，非常适用

于水稻理化诱变突变体库的突变基因克隆［２０］

。

淮稻５号是江苏徐淮地区淮阴农业科学研究所育成的迟熟中粳品种，该品种具有株型适宜、灌浆速度快、出糙率高、千粒质量高、抗倒能力强、耐低

温等特点［２１］。淮稻５号尤其适宜直播，直播中丰产

性、抗逆性、稳产性和品质等综合性状均较好，自推广以来一直占据江苏省水稻品种市场重要份额，根据全国水稻数据中心统计，淮稻５号目前累计推广

面积超过１７５．２万ｈｍ２（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒｉｃｅｄａｔａ．ｃｎ／

ｖａｒｉｅｔｙ／ｖａｒｉｓ／６０４６０４．ｈｔｍ）。但由于缺少适宜的研究材料，淮稻５号优良农艺性状的分子机制一直没有得到解析。因此，构建淮稻５号的突变体库，选取适宜的突变体材料解析淮稻５号株型、抗倒、灌浆快、耐低温、高出糙率等优良性状的分子机制，能够为后续品种的开发提供新的基因资源和理论基础。本研究利用ＭＮＵ诱变构建淮稻５号的突变体库，通过对３５６２个突变家系的筛选获得了５１２个表型稳定的突变体。此外，利用ＭｕｔＭａｐ技术对其中的２个矮杆突变体进行了突变基因的定位。该突变体库以期为淮稻５号优良性状的解析提供突变体资源，具有一定的生产意义和理论意义。

实获得Ｍ１种子。１．２　突变体种植及筛选

收获的Ｍ１种子同年冬天送至海南陵水南繁育种基地加代，单株收种获得Ｍ２种子。２０１８年正季将Ｍ２种子种植于江苏徐淮地区淮阴农业科学研究所水稻基地，每个Ｍ２家系种植３０株。对Ｍ２家系进行全生育期筛选分离出有明显突变表型的家系，出现突变植株的家系按单株分别收取突变植株与野生型植株的种子。对未分离出突变表型的家系单株收种磨米鉴定米质与出糙率。同时所有Ｍ２家系分家系混收一部分种子储存于种子库中。所有诱变材料均按正常大田条件管理，单株插秧。１．３　遗传分析

ｈｗ５、ｈｗ７突变体与淮稻５号做正反交构建遗传分析群体，同年冬季于海南陵水加代获得Ｆ２种子，第２年正季将Ｆ２分离群体种植于淮安，成熟期统计Ｆ２群体中野生型表型和突变体表型植株数量，

计算分离比，进行卡方（χ２

）

测验。１．４　基因定位

从ｈｗ５×淮稻５号与ｈｗ７×淮稻５号的Ｆ２分离群体中分别取野生型表型单株和突变表型单株叶片各３０个，分别提取ＤＮＡ后，取等量混合形成ＤＮＡ混池。采用ＭｕｔＭａｐ方法克隆株型基因，获得基因序列和突变位点信息，ＭｕｔＭａｐ由成都天成未来科技有限公司完成。２　结果与分析

２．１　突变体库的创建和筛选

３０株只保留当天开花颖花的淮稻５号植株经ＭＮＵ处理后结实收获Ｍ１种子，将Ｍ１种子种植于海南，共获得Ｍ１植株４８８７株，其中完全不育的Ｍ１植株１７４株，分单株收种获得Ｍ２种子。Ｍ２种子种植后共获得Ｍ２家系３５６２个。对Ｍ２家系进行全生

—２８—育期观察，筛选株型、叶色、抽穗期、育性等方面的突变体材料，共获得５１２个突变家系，包括株型、叶占总家色、育性、抽穗期、早衰、类病斑等８种类型，系数量的１４．３７％。其中株型突变体出现频率最

高，为２０３个，占总家系数量的５．７０％；脆秆突变体出现频率最低，为２个，占总家系数量的０．０６％（图１、表１）。

表１　Ｍ２家系中突变类型统计

表型株型　叶色　育性　抽穗期早衰　类病斑叶型　脆秆　合计　

家系数量

（个）２０３１２６８４５２１７１５１３２５１２

频率

（％）５．７０３．５４２．３６１．４６０．４８０．４２０．３６０．０６１４．３７

２．２　株型突变体遗传分析

为进一步了解本研究突变体库的质量，从中选取ｈｗ５及ｈｗ７２个株型突变体进行ＭｕｔＭａｐ基因定ｗ５表型为半矮秆，ｈｗ７表型为矮秆、分蘖位。其中ｈ

角增大（图１－Ｃ、图１－Ｄ、表２）。分别将ｈｗ５、ｈｗ７突变体与淮稻５号正反交，构建Ｆ组２分离群体。２试验ＦＦ１均表现为野生型表型，２中出现野生型表分别统计各个Ｆ型和突变体表型２种分离，２群体中野生型表型和突变体表型植株的数量，进行卡方测验。结果表明，ｈｗ５、ｈｗ７分离群体的分离比均符合３∶１（表３）。说明，ｈｗ５、ｈｗ７的表型均受隐性单核基因控制。

表２　淮稻５号与ｈｗ５、ｈｗ７突变体农艺性状分析

材料淮稻５号ｈｗ５ｈｗ７

株高

（ｃｍ）９０．８３±２．３５

６９．６５±１．７２６４．２３±２．３３

—２９—

有效分蘖

（个）１９．３±１．７

１３．６±２．４１５．７±５．６

剑叶长

（ｃｍ）２５．３６±３．７４２６．７７±２．３４

穗长

（ｃｍ）１５．８１±２．１２１４．８３±１．０３

一次枝梗

（个）１４．０±１．２

１０．２±０．７

二次枝梗

（个）３５．５±２．４

３０．５±１．７２８．９±１．１

每穗粒数

（粒）１８４．２±１２．７

１５１．４±１５．６１５６．３±９．６



１７．９３±１．７２１３．３３±１．６７１４．９±０．９

　　注：．０１水平上差异显著。表示与淮稻５号相比在０

表３　遗传分析

杂交组合淮稻５号／ｈｗ５ｈｗ５／淮稻５号淮稻５号／ｈｗ７ｈｗ７／淮稻５号

２

　　注：（０．０５，１）＝３．８４。χ

总数

（株）３４０２９３４４０３７０

正常表型植株

（株）

２４９２１７３２６２７４

突变表型植株

（株）

９１７６１１４９６

２

（３∶１）χ

０．４７７０．０９２０．１４８０．１３０

２．３　ＭｕｔＭａｐ定位

在ｈｗ５、ｈｗ７的Ｆｈｗ５／淮稻５号，ｈｗ７／淮稻５２（号）分离群体中，分别取野生型表型单株和突变表型单株叶片各３０个，分别提取ＤＮＡ后，取等量混合ＮＡ池，利用ＭｕｔＭａｐ方法克隆突变基因。根构建Ｄ

据ＳＮＰ密度图选择ＳＮＰ密度大的区域为候选区段（图２），利用ｖａｒＢＳｃｏｒｅ算法，将方差进行对数处理，获得最显著的变异连锁区段，通过计算不同混池间各突变型的频率距离，采用距离差异来反映标记与目标区域的连锁强度，根据得到的混池间的ＳＮＰ位点集及基因型的深度信息，计算不同混池间的突变频率差异，最终获得候选基因（表４）。３　结论与讨论

本研究通过ＭＮＵ诱变构建１个包含３５６２个从该突变体库筛选家系的淮稻５号突变体库，

获得５１２个突变家系，总诱变概率为１４．３７％。其中包括株型、叶色、育性、抽穗期、早衰、类病斑等多种类型，不同类型突变体出现的频率为０．０６％～５７０％。该突变体库突变类型丰富，通过对该库中相关突变体的基因定位和功能研究有助于解析淮稻５号优良农艺性状的分子机制，能够为后续品种的开发提供新的基因资源和理论基础。尽管已从该突变体库中筛选获得了大量突变体，但是介于筛选手段及试验条件的，未能从该突变体库中筛选到灌浆快、灌浆期耐低温相关性状的突变体，这意味着该突变体库中仍然有大量未被筛选出

的突变体，随着筛选手段和试验条件的改善，该突变体库还有巨大的潜力可以挖掘。

ＭｕｔＭａｐ技术基于近些年日趋完善的测序技术而产生，通过将突变群体的测序结果与野生型相对比，可以快速定位突变基因。为了满足分子标记多态性的需求，传统的图位克隆一般采用籼粳杂交构建分离群体，所需分离群体数量大，且分离群体容易受到遗传背景差异的影响从而增加表型判断的难度。与传统图位克隆相比，ＭｕｔＭａｐ所需群体较小，且定位群体遗传背景一致，可以避免父母本之间遗传背景差异的影响，降低基因克隆成本的同时，大大缩短了基因定位所需的时间。

ｕｔＭａｐ技术对ｈｗ５和ｈｗ７２个株本研究利用Ｍ

型突变体进行了基因定位。通过遗传分析证明ｈｗ５和ｈｗ７的突变表型均受隐性单核基因控制，适用于ｕｔＭａｐ的方法定位突变基因。通过将ｈｗ５、通过Ｍ

ｈｗ７与淮稻５号分别杂交后构建约３００～４００个单株的Ｆ从中分别筛选野生型表型和突变２分离群体，型表型单株各３０个，提取ＤＮＡ后等量混合构建混池，经过重测序和比对分析后获得候选基因。其中ｈｗ５筛选获得５个导致氨基酸序列变化的ＳＮＰ位ｗ７筛选到１个导致氨基酸序列变化的ＳＮＰ点，而ｈ位点，后续可以通过在分离群体中验证突变位点是否与突变表型共分离获得突变基因。

ＮＵ诱变获得了包含３５６２个家本研究利用Ｍ

系的淮稻５号的突变体库，并从中筛选获得５１２个突变家系。随着筛选技术手段的改进，该突变体库

—３０—还有巨大的潜力可以挖掘。同时利用ＭｕｔＭａｐ技术对ｈｗ５和ｈｗ７２个株型突变体进行基因定位。借助ＭｕｔＭａｐ技术，对该库中相关突变体的基因定位和功能研究有助于解析淮稻５号优良农艺性状的分子机制，能够为后续品种的开发提供新的基因资源和理论基础。

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［１０］ＷａｌｂｏｔＶ．Ｓａｔｕｒａｔｉｏｎｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓｕｓｉｎｇｍａｉｚｅｔｒａｎｓｐｏｓｏｎｓ［Ｊ］．

ＣｕｒｒｅｎｔＯｐｉｎｉｏｎｉｎＰｌａｎｔＢｉｏｌｏｇｙ，２０００，３（２）：１０３－１０７．［１１］ＹａｍａｚａｋｉＭ，ＴｓｕｇａｗａＨ，ＭｉｙａｏＡ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｒｉｃｅｒｅｔｒｏｔｒａｎｓｐｏｓｏｎ

Ｔｏｓ１７ｐｒｅｆｅｒｓｌｏｗ－ｃｏｐｙ－ｎｕｍｂｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅｓａｓｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎｔａｒｇｅｔｓ［Ｊ］．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＧｅｎｅｔｉｃｓａｎｄＧｅｎｏｍｉｃｓ，２００１，２６５（２）：３３６－３４４．［１２］ＨｉｒｏｃｈｉｋａＨ，ＳｕｇｉｍｏｔｏＫ，ＯｔｓｕｋｉＹ，ｅｔａｌ．Ｒｅｔｒｏｔｒａｎｓｐｏｓｏｎｓｏｆｒｉｃｅ

ｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｍｕｔａｔｉｏｎｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅ［Ｊ］．ＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓｏｆｔｈｅＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓｏｆＡｍｅｒｉｃａ，１９９６，９３（１５）：７７８３－７７８８．

［１３］ＨｉｒｏｃｈｉｋａＨ．ＣｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｔｈｅＴｏｓ１７ｒｅｔｒｏｔｒａｎｓｐｏｓｏｎｔｏｒｉｃｅ

ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｅｎｏｍｉｃｓ［Ｊ］．ＣｕｒｒｅｎｔＯｐｉｎｉｏｎｉｎＰｌａｎｔＢｉｏｌｏｇｙ，２００１，４（２）：１１８－１２２．

—３１—

表４　候选基因

突变体ｈｗ５

染色体Ｃｈｒ．１Ｃｈｒ．１Ｃｈｒ．１Ｃｈｒ．１Ｃｈｒ．１Ｃｈｒ．１Ｃｈｒ．１Ｃｈｒ．１Ｃｈｒ．１Ｃｈｒ．１Ｃｈｒ．１Ｃｈｒ．１Ｃｈｒ．１Ｃｈｒ．１Ｃｈｒ．１Ｃｈｒ．１

ｈｗ７

Ｃｈｒ．３Ｃｈｒ．５

　　注：“－”表示无变化。

位置

（ｂｐ）１３７７６１１２１４６７９６７１１４８０８７４３１５６３２３５８１５８４７５１９１６２９２３４０１６７１９１２７１７９００５１３１７９７８８１８１８１９５８６２１８２８５６４５１８３７７３４３１９２９０３３６１９９４３５４７２０１１８０２８２０２１２６９１２２８４２３７６２０６６６０６０

ＳＮＰＧ→ＡＧ→ＡＧ→ＡＧ→ＡＧ→ＡＧ→ＡＧ→ＡＧ→ＡＧ→ＡＧ→ＡＧ→ＡＡ→ＴＧ→ＡＧ→ＡＧ→ＡＧ→ＡＧ→ＡＧ→Ａ

突变基因ＬＯＣ＿Ｏｓ０１ｇ２４４３０ＬＯＣ＿Ｏｓ０１ｇ２５８８０

基因间ＬＯＣ＿Ｏｓ０１ｇ２７９６０ＬＯＣ＿Ｏｓ０１ｇ２８２９０

基因间３′ｐｒｉｍｅＵＴＲ基因间基因间基因间基因间基因间基因间ＬＯＣ＿Ｏｓ０１ｇ３６０４０ＬＯＣ＿Ｏｓ０１ｇ３６２８０

基因间基因间ＬＯＣ＿Ｏｓ０５ｇ３４８２０

氨基酸变化Ａｌａｈｒ→ＴＰｒｏｅｕ→Ｌ

－Ｇｌｙｓｐ→ＡＰｒｏｅｒ→Ｓ

－－－－－－－－提前终止同义突变

－－提前终止

表达蛋白逆转座子蛋白逆转座子蛋白表达蛋白功能注释表达蛋白脱磷酸辅酶Ａ激酶

［１４］ＳｈａｎＱＷ，ＷａｎｇＹＰ，ＬｉＪ，ｅｔａｌ．Ｔａｒｇｅｔｅｄｇｅｎｏｍｅｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ

ｃｒｏｐｐｌａｎｔｓｕｓｉｎｇａＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，２０１３，３１（８）：６８６－６８８．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ

［１５］ＬｉＴ，ＨｕａｎｇＳ，ＪｉａｎｇＷＺ，ｅｔａｌ．ＴＡＬｎｕｃｌｅａｓｅｓ（ＴＡＬＮｓ）：ｈｙｂｒｉｄ

ｐｒｏｔｅｉｎｓｃｏｍｐｏｓｅｄｏｆＴＡＬｅｆｆｅｃｔｏｒｓａｎｄＦｏｋＩＤＮＡ－ｃｌｅａｖａｇｅｄｏｍａｉｎ［Ｊ］．ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ，２０１１，３９（１）：３５９－３７２．［１６］ＫｉｍＹＧ，ＣｈａＪ，ＣｈａｎｄｒａｓｅｇａｒａｎＳ．Ｈｙｂｒｉｄｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅｓ：ｚｉｎｃ

ｆｉｎｇｅｒｆｕｓｉｏｎｓｔｏＦｏｋＩｃｌｅａｖａｇｅｄｏｍａｉｎ［Ｊ］．ＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓｏｆｔｈｅＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓｏｆＡｍｅｒｉｃａ，１９９６，９３（３）：１１５６－１１６０．

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［１８］ＭｃＣａｌｌｕｍＣＭ，ＣｏｍａｉＬ，ＧｒｅｅｎｅＥＡ，ｅｔａｌ．Ｔａｒｇｅｔｅｄｓｃｒｅｅｎｉｎｇｆｏｒ

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ｆｅｒｔｉｌｉｚｅｄｅｇｇｃｅｌｌｗｉｔｈＮ－ｍｅｔｈｙｌ－Ⅳ－ｎｉｔｒｏｓｏｕｒｅａｉｎｒｉｃｅ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＦａｃｕｌｔｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，１９７９，２４（２）：１６５－１７４．［２０］ＡｂｅＡ，ＫｏｓｕｇｉＳ，ＹｏｓｈｉｄａＫ，ｅｔａｌ．Ｇｅｎｏｍｅｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｒｅｖｅａｌｓ

ａｇｒｏｎｏｍｉｃａｌｌｙｉｍｐｏｒｔａｎｔｌｏｃｉｉｎｒｉｃｅｕｓｉｎｇＭｕｔＭａｐ［Ｊ］．ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１２，３０（２）：１７４－１７８．

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