——— 几种畜禽病料的采集技术 胡德武（江苏省扬州市邗江区蒋王街道兽医站２２５１２６） 陈勇任文１畜禽病料采集技术 （江苏省扬州市开发区八里畜牧兽医站２２５１３１） 样品名称，并附上发病、死亡等相关 态立即送实验室．否则须置４℃冰箱 １．１样品采集的原则 采集检测样品是诊断检测工作的 重要内容。采集样品时，需要符合以 下规定： １．１．１适时采样 根据检测要求及检测对象和检验 项目的不同，选择适当的采样时机十 分重要。应严格按规定时间采样，有 临床症状需要作病原分离的，样品必 须在病初的发热期或症状典型时采样． 病死的动物，应立即采样。 １．１．２合理采样 根据诊断检测的要求。采集足够 数量的样品，尽可能地侧重采样。对 未能确定为何种疫病的，应全面采样。 １．１－３典型采样 选取未经药物治疗、症状最典型 或病变最明显的样品，如有并发症， 还应兼顾采样。 １．１．４无菌采样 除供病理组织学检验外，必须无 菌操作采样，采样用具、容器均须无 菌处理．尸体剖检需采集样品的，先 采样后检查。以免人为污染样品。 １．１．５适量采样 采集样品的数量要满足诊断检测 的需要．并留有余地，以备必要时复 检使用。 １．１．６样品处理 应一种样品一个容器，且要立即 密封．根据样品的性状检验要求的不 同，作暂时的冷藏、冷冻或其它处理， 并在容器上贴上标签，标签要防止脱 落，标明采集的时间、地点、号码和 资料尽快送实验室。 １．１．７安全采样 既要保护采样人员，又要防止病 原外泄，还要防止样品受到污染。 １．１．８样品包装 主要是密闭。防止样品损坏、污 染和外泄等意外发生。 １．１．９迅速送检 应尽快送实验室进行检测，延误 送检时间．会影响到检测质量和结果 的可靠性。 １．２血液样品的采集 １．２．１病毒检验用血液样品 应在动物发病初体温升高期采集。 血液样品必须是脱纤血或是抗凝血。 抗凝剂可选用肝素或ＥＤＴＡ。枸橼酸钠 对病毒有轻微毒性。一般不宜采用。 采血前，在真空采血管或其它容器内 按每毫升血液加入０．１％肝素ｌｍｌ或 ＥＤＴＡ２０ｍｇ。采集的血液立即与抗凝剂 充分混合，防止凝固。采脱纤血时， 先在容器内加入适量小玻璃珠，加入 血液后。反复振荡，以便脱去血液纤 维。采集的血液经密封后贴上标签， 以冷藏状态立即送实验室。必要时， 可在血液中按每毫升加入青霉素和链 霉素各５００～１０００ＩＵ。以抑制血源性可 采血中污染的细菌。 １．２．２细菌检验样品 采血应在动物发病初体温升高或 发病期，未经药物治疗期间采集。血 液应脱纤或加肝素抗凝剂ｆ或ＥＤＴＡ或 枸缘酸钠），但不可加入抗生素。采集 的血液经密封后贴上标签．以冷藏状 内暂时保存．但时间不宜过久，以免 溶血。 １．２．３血清学检验样品 用作血清学检验的样品不加抗凝 剂或脱纤处理。为保障血清质量，一 般情况下，空腹采血较好。采集的血 液贴上标签．室温静置待凝固后送实 验室，并尽快将自然析出的血清或经 离心分离出的血清吸出，按需要分装， 再贴上标签冷藏保存备检。较长时间 才检验的，应冻结保存，但不能反复 冻融，否则抗体效价下降。采集双份 血清检测比较抗体效价变化的，第一 份血清采于发病的初期，第二份采于 第一份血清后３－４周，双份同时送实 验室。 １．２．４寄生虫检验样品 因不同的血液寄生虫在血液中出 现的时机及部位各不相同，因此需要 根据各种血液寄生虫病的特点，取相 应时机及部位的血液制成血涂片，送 实验室。 １．３组织样品的采集 组织样品一般由扑杀动物或病死 尸体剖中采集。从尸体采样时．先剥 去动物胸腹部皮肤，以无菌器械将腹 腔打开，根据检验目的和生前疫病的 初步诊断．无菌采集不同的组织。 １－３．１病毒检验样品 必须以无菌技术采集。如果时间 较长．可将组织块浸泡在ｐＨ７．４左右 的乳酸液或磷酸缓冲肉汤保护液内， 并按每毫升保护液加入青霉素、链霉 素各１０００ＩＵ，然后贴上标签，放人冷 ２０１ ２．２口叵嗣匾矗囤３５ 藏容器内送实验室。 ｌ－３．２细菌检验样品 供细菌检验的组织样品，应新鲜 并以无菌技术采集。如尸体已． 仍可采集长骨或肋骨，从骨髓中分离 细菌。采集的所有组织分别放人灭菌 的容器内并立即密封，贴上标签，放 入冷藏容器立即送实验室。 １．４粪便样品的采集 １．４．１病毒检验样品 分离病毒的粪便必须新鲜。少量 采集时，以灭菌的棉拭子从直肠深处 或泄殖腔粘膜上蘸取粪便，并立即投 入灭菌的试管内密封，或在试管内加 入少量ｐＨ７．４的保护液再密封，贴上 标签冷藏送实验室。 １．４．２细菌检验样品 作细菌检验的粪便，在动物使用 抗菌药物之前。从直肠或泄殖腔粘膜 上采集。贴上标签冷藏送实验室。 １．４＿３寄生虫检验样品 粪便样品采新排出的粪便。以保 持虫体或虫体节片及虫卵的固有形态。 采得的粪便以冷藏不冻结状态送实 验室。 ２几种畜禽疫病的样品采集 ２．１口蹄疫样品的采集、保存和 运送 口蹄疫病毒在病畜的水疱皮内及 其淋巴液中含毒量最高。在发热期血 液内的病毒含量最高，退热后在奶、 尿、口涎、泪、粪便等都含有一定量 的病毒。 ２．１．１组织样品 （１）样品的选择 用于病毒分离、鉴定的样品以发 病动物ｆ牛、羊或猪）未破裂的水泡皮 和水泡液为最好。对临床健康但怀疑 带毒的动物可在扑杀后采集淋巴结、 脊髓、肌肉等组织样品作为检测材料。 （２）样品的采集和保存 样品采集部位可用清水清洗（切忌 使用酒精、碘酒等消毒剂消毒、擦拭）， 剪取病畜的新鲜水泡皮３—５克放人灭 ３６圈暄蜀匦盈囤２０１ ２．２ 菌小瓶中，加适量５０％甘油／磷酸盐缓 冲液（ｐＨ７．４），加盖密封；也可采用无 菌器具采集水泡液至少ｌｍ１．装入灭菌 小瓶中（可加适量抗菌素），加盖密封 作冷冻保存。 （３）在无法采集水泡皮和水泡液 时，可采集淋巴结、脊髓、肌肉等组 织样品３～５克装入洁净小瓶内，加盖 密封尽快冷冻保存。 样品的包装瓶上均要贴上标签。 写明采样地点，动物种类。编号．时 间等。 ２．１．２牛、羊食道一咽部分泌物 （０一Ｐ液）样品 （１）样品采集 被检动物在采样前应禁食ｆ可饮 水）１２小时，防胃内容物反流。采样 探杯在使用前经Ｏ．２％柠檬酸或２％氢 氧化钠浸泡５分钟。再用洁净水冲洗。 采样时动物站立保定．将探杯随吞咽 动作送人食道上部１０～１５ｃｍ处，轻轻 来回移动２～３次，然后将探杯拉出。 （２）样品的保存 将采集到的８—１０Ｉｌｌ１０一Ｐ液倒人加 有８～１０Ｉｌｌｌ细胞培养液或磷酸缓冲液 （０．０４ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ７．４）灭菌玻璃容器中， 密封后摇匀作冷冻保存，用于病原检 测，做出追溯性诊断。 ２．１．３血清 对怀疑曾有疫情发生的畜群．错 过组织样品采集时机时．可无菌操作 采集动物血液。每头不少于１０ＩＩｌｌ。无 菌分离血清，加盖密封后冷藏保存， 可做追溯性诊断。 ２．１．４采集登记 采集样品时要填写样品采集登 记表。 ２．１．５容器密封 装样玻璃容器必须密封，即防水 又不透气。样品容器需加贴防水标签， 并写明样品编号、采集地点、动物种 类、时间等。 ２．１．６样品运送 运输前将样品玻璃容器装入金属 套筒中，套筒应填充防震材料．加盖 密封，与采样记录一同装入专用运输 容器中。专用运输容器应隔热坚固， 内装适当冷冻剂和防震材料。外包装 上要加贴生物安全警示标志。 ２．２禽流感的样品采集、保存和 运输 病毒主要在呼吸道粘膜细胞内 增殖。 ２．２．１病禽 （１）至少从５只濒死禽采集样品。 样品包括：泄殖腔拭子和气管拭子ｆ置 于缓冲液中）各５个（小珍禽可采集新 鲜粪便）；气管和肺的混样５个，肠管 及内容物的混样５个；肝、脾、肾和 脑等组织样品（不能混样）各５个。 采集方法：①泄殖腔棉拭子：将 棉拭子插入肛门并旋转．使粪便沾在 拭子上，后放在运输缓冲液中。②气 管棉拭子：活鸡采样时，将棉拭子插 入活鸡的 管网。轻轻擦拭气管壁并 放入缓冲液中。死亡动物采气管样品 时，可在肺和气管离体情况下进行采 集．应将棉拭子插入较深部位用力擦 拭。并按上述方法将棉拭子放在运输 缓冲液中。③粪便样品：可从活禽市 场采取新鲜粪便。用棉拭子沾取粪便． 并将采好的样品放在运输缓冲液中。 （２）分别采集至少ｌＯ个病鸡的血 样（急性发病期血清）。采集１０只病禽 的血样。使用一次性采血器．心脏或 翅静脉采血，每只禽采血样２￣３ｍｌ。经 离心或自然析出血清后．将血清移到 指形管中。封好口，贴好标签。不同 禽只的血样不能混合。 ２．２．２病死禽 无发病禽时．可采刚死亡的病死 禽。棉拭子放含有抗菌素的ｐＨ ７．０～７．４ 的ＰＢＳ液．且在组织和气管拭子悬液 中加入青霉素（２０００１Ｕ／ｍ１）、链霉素 （２０００１Ｕ／ｍ１）、庆大霉素（５０ａｇ／ｍ１）、制 霉菌素（１００００１Ｕ／ｍ１）。粪便和泄殖腔 拭子所用的抗生素浓度应提高５倍。 加入抗生素后ｐＨ值应调至７．４。 豳 阜新县建立人工草地的技术措施 梁世坤（辽宁省阜新蒙古族自治县草原监理站１２３１００） 摘要：建立人工草地需要根据地理位 这对植物生长十分有利。北部和西部 牧草的生长条件。 置、土壤、降水及地形条件等进行实 土壤主要为褐土，南北为棕壤土，中 １．２地形条件 施。笔者在建立人工草地中，对土壤 部和东部为草甸土，在北大河、绕阳 建立人工草地要选择地势较为平 耕作、播种、田间管理等方面进行了 河等沿岸为沙壤土。 坦的原生植被遭到破坏、草地遭到重 多年的实践，并进行了总结，旨在为 由于受自然因素和人为因素的影 度“三化”破坏的地段．尽量避免开 阜新蒙古族自治县乃至辽西北建立人 响，草原的生产能力远远满足不了畜 垦好的草地。但有一部分草坡土质瘠 工草地提供参考依据。 牧业生产发展需要，大面积的天然草 薄。土层达不到１０ｅｍ的不适宜补播牧 关键词：草地；退化；牧草；品种； 原严重退化、沙化、盐碱化，牧草产 草，岩漠化严重的不适宜补播牧草。 播种；人工草地；建植管理；阜新县 量下降５０％以下，严重地影响了当地 ２５。以上的坡度不适宜补播牧草，如果 畜牧业的发展。为了加快治理退化、 土层达到要求确需补播的采取环山等 阜新蒙古族自治县位于辽宁省西 沙化、盐碱化草地，防止草原继续退 高打点补播。 北部．是辽宁省各县面积最大的县， 化，提高草原的生产能力，达到草畜 ２建立人工草地的技术措施 总土地面积９３６．９万亩，其中草原面积 平衡．实现畜牧业可持续发展，尽快 ２．１土壤耕作技术 为１７０万亩。全县属低山丘陵地区， 建立人工草地成为必然。 牧草的补播关键是整地，对补播 境内有大小山头４４８３座，其中乌兰木 １建立人工草地所需条件 的地方必须破土。对熟地撂荒的要采 图山海拔高度８３１．４米。为全县最高 建立人工草地应全面考虑当地的 用浅翻灭茬、靶磨、的作业程序。 峰。全县属于半湿润半干旱的性 自然条件，并且要遵循自然规律。阜 对退化草地和生荒地要深翻（深翻深 季风性气候，总的特点是：春季干旱 新县雨热同期，光照资源充足。能够 度２５ｃｍ左右）、重靶，消灭草地原生 而多风。夏季炎热而多雨，秋季冷凉 满足各种牧草生长的需要．是各种牧 植被并破坏其再生能力，使要补播的 而早霜．冬季少雪而寒冷。年平均气 草种子的成熟带。 草地牧草免受野生植物的影响。地表 温７．１℃，极端最高气温４０．９￣Ｃ，极端 １．１土壤条件 达到疏松、细腻，便于牧草出苗和后 最低气温一３０．６￣Ｃ．平均日照时数 北部和西部土壤主要为褐土．南 期生长发育。 ２８６５．５小时．大于等于ｌ０℃年积温 北为棕壤土，中部和东部为草甸土， ２．２人工草地的播种 ３２９８．３￣Ｃ，无霜期１５０天，年平均降水 在北大河、绕阳河等沿岸为沙壤土。 ２－２．１种子的选择与处理 量４５０ｍｍ，而其多集中在七、八月份。 从土壤、ｐＨ值、有机质含量均能满足 牧草种子的好坏直接关系到出苗、 ２．２．３样品的保存和运输 ７Ｏ℃或以下）保存。 脾脏。 （１）血样要单独存放，不能混合。 ２．３猪瘟样品的采集 ２．４新城疫样品的采集 （２）样品应密封于塑料袋或瓶中， 猪瘟病毒复制的主要部位是扁桃 新城疫病毒存在于病鸡所有器官、 置于有制冷剂的容器中运输，容器必 体，然后经淋巴管进入淋巴结。继续 体液、分泌物和排泄物．以脑、脾和 须密封，防止渗漏。 增殖．随即到达外周血液，从这时起 肺含毒量最高，骨髓含毒时间最长。 （３）样品若能在２４小时内送到实 病毒在脾、骨髓、内脏淋巴结和小肠 样品：眼分泌物、泄殖腔拭子、脾脏、 验室，冷藏运输。否则，应冷冻运输。 的淋巴结组织繁殖到高滴度。样品： 气管粘膜、脑等。 若样品暂时不用，则应冷冻ｆ最好一 全血、骨髓、淋巴结、扁桃体、肾脏、 ２０１ ２．２口叵目匿圃 ３７
