２０１２年６月５日第２１卷第ｌｌ期 Ｖｏ１．２１，Ｎｏ．１１，Ｊｕｎｅ ５，２０１２ 中ｌ 茄 Ｃｈｉｎａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕ咖口 ・药物鉴定・ Ｄｒｕｇ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ 高效液相色谱法测定复方黄连胶囊中盐酸小檗碱含量 金杏芳 （浙江省金华市浦江县中医院中药房，浙江金华 ３２２２００） 摘要：目的建立测定复方黄连胶囊中盐酸小檗碱含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为ＺｏｒｂａｘＸＤＢ—Ｃｓ柱（１５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ，５ ｍ），流 动相为水（含０．３４％磷酸二氢钾和０．３４％十二烷基硫酸钠）一乙腈（５３：４７），流速为１．０ ｍＬ／ｍｉｎ，柱温为２５℃，检测波长为３４５ ｎｍ。 结果盐酸小檗碱进样量在０．１８８～１．１２９ｔｘｇ范围内与峰面积线性关系良好，ｒ＝０．９９９５，平均回收率为１００．９３％，ＲＳＤ为１．５８％（ｎ＝９）。 结论该方法简便、可靠、准确，可用于复方黄连胶囊的质量控制。 关键词：黄连；盐酸小檗碱；高效液相色谱法；含量测定 中图分类号：Ｒ２８４．１；Ｒ２８６．０ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００６—４９３１（２０１２）１１—００２１—０２ （每１ ｍＬ含盐酸小檗碱０．３７６ ｍｇ）。取复方黄连胶囊约５０ ｍｇ，精 密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入酸性甲醇（每１００ ｍＬ甲醇中 复方黄连胶囊是由黄连、自术等中药组方的复方制剂，用于 治疗胃肠道疾病。黄连为方中君药，为有效控制制剂的质量，保证 疗效，笔者建立了测定复方黄连胶囊中盐酸小檗碱含量的高效液 相色谱法，现报道如下。 １仪器与试药 Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ Ｓｅｒｉｅｓ高效液相色谱仪，ＤＡＤ检测器（美捷 伦科技有限公司）；甲醇为色谱纯（美国Ｂ＆Ｊ公司），娃哈哈纯净 水，其余试剂均为分析纯；盐酸小檗碱对照品（供含量测定用，中 国药品生物制品检定所，批号为１１０７１３—２００２０８）；复方黄连胶 囊（市售品）。 ２ 方法与结果 加入１．０ ｍＬ盐酸）１５ ｍＬ，称定质量，放置１０ ｒａｉｎ，超声４０ ｒａｉｎ （４０℃），取出，擦干外部，放冷，再称定质量，补足减失的质量，摇 匀，过膜（０．２０ Ｉｘｍ），即得供试品溶液。取按处方和制备工艺制备 的阴性样品，同法制备阴性对照品溶液。 ２．３方法学考察 线性关系考察：精密吸取对照品溶液０．１，０．２，０．３，０．４， ０．５，０．６ ｍＬ，分别置１ ｍＬ容量瓶中，加甲醇溶液稀释至刻度， 密塞、摇匀，即得各质量浓度对照品溶液，进样５ ＩｘＬ。以峰面积 为横坐标（ ）、进样量（ ｇ）为纵坐标（ｙ）进行线性回归，得回归 方程为Ｙ＝０．０００ ５ 一０．００６，ｒ＝０．９９９ ５（ｎ＝６）。结果表明，盐 酸小檗碱进样量在０．１８８～１．１２９ Ｉ，ｚｇ范围内与峰面积线性关系 良好。 ２．１ 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：Ｚｏｒｂａｘ ＸＤＢ—Ｃ８（１５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ，５ ｍ）；流动相： 水（含０．３４％磷酸二氢钾和０．３４％十二烷基硫酸钠）一乙腈（５３： ４７）；流速：１．０ ｍＬ／ｍｉｎ；柱温：２５ ｑｃ；检测波长：３４５ ｎｍ；进样量： ５ Ｌ。在上述条件下，复方黄连胶囊中盐酸小檗碱与其他组分能 达到基线分离（见图１）。盐酸小檗碱保留时间为１Ｏ．５ ｍｉｎ，理论 板数以盐酸小檗碱色谱峰计应不低于２ ０００。 精密度试验：取同一对照品溶液，依法连续进样５次。结果盐 酸小檗碱峰面积的ＲＳＤ为０．２６％（／Ｚ＝５）。 稳定性试验：取同一供试品溶液，依法分别在０，１，２，４，８， １２ ｈ时进样。结果盐酸小檗碱峰面积的ＲＳＤ为０．５６％（ｎ＝６）， 表明样品中盐酸小檗碱在１２ ｈ内稳定性良好。 重复性试验：取同一批次样品，精密称取５份，按供试品溶液 的制备与含量测定方法依法制备与测定。结果样品中盐酸小檗碱 的含量分别为４．３５％，４．４２％，４．５８％，４．５１％，４．４０％，ＲＳＤ为 ０ ４ １２ １．１２％（ｎ＝５）。 Ａ 加样回收试验：取已知含量样品，添加相当于样品含量的 ８０％，１００％，１２０％的盐酸小檗碱对照品，按供试品溶液制备方法 制备溶液，按拟订的色谱条件测定，计算回收率。结果见表１。 表１ 盐酸小檗碱加样回收试验结果（ｎ＝９） Ｏ ４ 样品含量（ｍｇ）加入量（ｍｇ）测得量（ｍｇ）回收率（％） （％）ＲＳＤ（％） Ｂ ０ ４ ８ ｌ２ １６ Ｃ １．盐酸小檗碱．ｔＲ＝１０．５ｍｉｎ Ａ．对照品溶液 Ｂ．供试品溶液 Ｃ．阴性对照品溶液 图１ 高效液相色谱图 ２．２ 溶液制备 ２．４样品含量测定 取３批样品，按２．２项下方法制备供试品溶液，按２．１项下 取盐酸小檗碱对照品约４ ｍｇ，精密称定，置１０ ｍＬ容量瓶 中，加甲醇溶液溶解并稀释至刻度，密塞、摇匀，即得对照品溶液 条件测定。结果３批样品中盐酸小檗碱的含量分别为４．４１％， ・药物鉴定・ 中目茜 ＣＩ｝ｌｉｎａ ａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ２０１２年６月５日第２ｌ卷第１１期 Ｖｏ１．２１，Ｎｏ．１ｌ，Ｊｕｎｅ ５，２０１２ Ｄｒｕｇ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ 益精灵口服液质量标准研究木 温悦，赖艳，孟德胜 ４０００４２） （第三军医大学第三附属医院野战外科研究所药剂科，重庆摘要：目的对益精灵口服液的质量标准进行研究。方法采用薄层色谱法对处方中的何首乌、补骨脂进行定性鉴别，采用高效液相色谱 法对制剂中何首乌的成分二苯乙烯苷含量进行测定。结果定性鉴别方法专属性强。二苯乙烯苷质量浓度在０．６２５～１６０ ｔｘｇ／ｍＬ范围 内与峰面积线性关系良好，ｒ＝０．９９９ ９，平均加样回收率为１０２．２８％，ＲＳＤ为２．０６％（ｎ＝９）。结论该方法简便、专属、重现性好，可有 效控制益精灵口服液的质量。 关键词：益精灵口服液；薄层色谱法；高效液相色谱法；质量标准；二苯乙烯苷；何首乌 中图分类号：１７，２８４．１；Ｒ２８６．０ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００６—４９３１（２０１２）１１—００２２—０３ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｑｕａｌｉｔｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ ｏｆ Ｙｉｊｉｎｇｌｉｎｇ Ｏｒａｌ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｗｅｎ Ｙｕｅ，Ｌａｉ Ｙａｈ，Ｍｅｎｇ Ｄｅｓｈｅｎｇ ｆ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，ｔｈｅ Ｔｈｉｒｄ Ａｆｉｌｆｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｔｈｉｒｄ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｃｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ ４０００４２） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｓｔａｎｄａｒｄｓ ｏｆ Ｙｉｊｉｎｇｌｉｎｇ Ｏｒａｌ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＴＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒａｄｉｘ Ｐｏｌｙｇｏｎｉ Ｍｕｈｉｌｆｏｒｉ，Ｐｓｏｒａｌｅａ ｃｏｒｙｌｉｆｏｌｉａ Ｌ．．Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ２，３，５，４’一ｓｔｉｌｂｅｎｅ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ＨＰＬＣ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｓｐｅｃｉｉｆｃ．Ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ ｏｆ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ２，３，５，４’一ｓｔｉｌｂｅｎｅ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ ｗａｓ ０．６２５—１６０ ｐ￣ｇ／ｍＬ（ｒ＝０．９９９９）． Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ １ ０２．２８％，ＲＳＤ ｗａｓ ２．０６％（ｎ＝９）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｙｉｊｉｎｇｌｉｎｇ Ｏｒａｌ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｙｉｊｉｎｇｌｉｎｇ Ｏｒａｌ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ；ＴＬＣ；ＨＰＬＣ；ｑｕａｌｉｔｙ ｓｔａｎｄａｒｄｓ 益精灵口服液由何首乌、枸杞子、补骨脂等中药组方，有健脑 安神、滋补肝肾、调节内分泌以及预防感冒等作用，能治疗无眠多 ２ 方法与结果 ２．１ 定性鉴别 梦、健忘、腰酸膝软、神疲乏力及更年期综合征、早衰等症，近期研 究表明其对辐射损伤也有一定的保护作用。该方为本院自制制 何首乌：取本品２０ ｍＬ，加醋酸乙酯２０ ｍＬ，盐酸０．５ ｍＬ，超 声处理２０ｍｉｎ，滤过，滤液挥干，残渣加１ ｍＬ醋酸乙酯溶解，作为 供试品溶液。另取大黄素对照品，加甲醇制成每１ ｍＬ含１ ｍｇ的 溶液，作为对照品溶液。除何首乌外，其余药材按处方比例取一定 量，按益精灵口服液制法制成一定体积的溶液，取溶液２Ｏ ｍＬ，按 供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。照薄层色谱法（２０１０ 年版《中国药典（一部）》附录ⅥＢ］试验，吸取上述３种溶液各 ５ Ｌ，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以甲苯一醋酸乙酯一甲酸 （２０：２：１）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏 剂，临床已应用多年，但未对其进行定量控制。为更好地控制该药 的质量，以何首乌中大黄素、补骨脂中异补骨脂素为定性指标，并 采用高效液相色谱法对方中君药何首乌的有效成分二苯乙烯苷 进行含量测定研究，现报道如下。 １ 仪器与试药 Ａｇｉｌｅｎｔ １２００系列高效液相色谱仪（美捷司）；Ｓａｇｏ— ｒｉｕｓ ＢＴ ２５Ｓ型电子分析天平（德国赛多利斯）；ＤＵ一８００型紫外分 光光度计（美国贝克曼公司）；ＲＥ一２０１Ｃ型恒温水浴锅，ＳＨＺ—Ｄ 至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位 置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液无干扰。结果见图１ Ａ。 补骨脂…：取本品１０ｍＬ，加入醋酸乙酯２０ｍＬ，０．５ ｍＬ盐酸， （Ⅲ）循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司）；ＲＥ５２９８Ａ 型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；ＫＱ一５０Ｂ型超声波清洗 仪（昆明市超声仪器有限公司）。二苯乙烯苷对照品（批号为 １１０８４４—２００９０８），大黄素对照品（批号为１１０７５６—２００１１０），异 补骨脂对照品（批号为１１０７３８—２００３０９），均来自中国药品生物 超声处２０ ｍｉｎ，分离，取醋酸乙酯层，挥干，残渣加０．５ ｍＬ醋酸乙 酯溶解，作为供试品溶液。另取异补骨脂素对照品，加醋酸乙酯制 成每１ ｍＬ含２ ｍｇ的溶液，作为对照品溶液。取除补骨脂外，其余 药材按处方比例取一定量，照益精灵口服液制法制成一定体积 的溶液，取该溶液２０ ｍＬ按供试品溶液制备方法制成阴性对照 制品检定所；益精灵口服液（第三军医大学大坪医院自制）；甲醇 和乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。 第三军医大学预研基金项目，项目编号：４０１１５—１２５８＃。 ４．４ ７％，４．６４％。 好，可用于复方黄连胶囊的质量控制。 参考文献： ［１］张金渝，王 波，金［２］周国莉，林晓莲，程３ 讨论 黄连中主要含原小檗碱型生物碱，已分离出来的生物碱有盐 酸小檗碱、巴马丁、黄连碱、甲基黄连碱、药根碱、木蓝碱等 １，其 中以盐酸小檗碱含量最高，达１０％。控制盐酸小檗碱的含量，可 从一定程度上控制提取物的质量。 在色谱条件研究中，对不同流动相及不同比例、不同流速等 进行了考察，根据样品的分离度、保留时间等因素，确定了文中的 最佳流动相。所建立的含量测定方法前处理简单，准确、稳定性 航，等．云南黄连不同部位有效成分及生物量 聪．ＨＰＬＣ法测定复方黄连液中盐酸小桑碱的 的比较研究［Ｊ］．中国中药杂志，２００８，３３（３）：３１１—３１３． 含量［Ｊ］．中医药导报，２０１０，１６（８）：８Ｏ一８１． ［３］崔学军．黄连及其有效成分的药理研究进展【Ｊ］．中国药师，２００６， ９（５）：４６９—４７０． （收稿日期：２０１１—０７—２６）
