浙江大学学报（农业与生命科学版） ３９（３）：２９１～２９８，２０１３ Ｊｏｕｒｎａ／ｏｆ Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ａｇｒｉｃ．＆Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．） ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｊｏｕｒｎａｌｓ．ｚｊｕ．ｅｄｕ．ｅｎ／ａｇｒ Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｄｘｂｎｓｂ＠ｚｊｕ．ｅｄｕ．ＣＤ ＤＯＩ：１０．３７８５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８—９２０９．２０１２．１１．１４１ 与黄瓜全雌性基因连锁的ＳＳＲ分子标记 周胜军 ，张鹏，朱育强，陈新娟，陈丽萍 （浙江省农业科学院蔬菜研究所，杭州３１００２１） 摘要黄瓜（Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ Ｉ ．）是重要的蔬菜栽培作物，其雌花率的高低直接影响着黄瓜产量．目前优良的黄瓜 品种都具备全雌性或强雌性特征，全雌性也是黄瓜优势育种的重要途径．但由于黄瓜性别表现受到遗传和环境等 多种因素的影响，传统的从表型上进行全雌性基因的选择效率不高．然而，借助与目的基因相连锁的分子标记进行 辅助育种能直接从基因型上对后代单株进行选择，准确率高，能够在苗期进行性型鉴定，从而大大地提高育种效 率．以全雌品系２４０一ｉ一２—２—３—１自交系和弱雌品系３—５—１—３—２—１—１—１—１—２及其Ｆ１、Ｆ２、ＢＣｌ Ｐ１和 ＢＣ Ｐ 世代为试验材料，进行田间鉴定和遗传规律分析．结果表明：黄瓜性别表达由寡基因控制，并受到一些背景 基因的修饰；黄瓜全雌性相关基因遗传模型符合加性一显性一上位性遗传模型．利用ＰＣＲ技术和ＳＳＲ分子标记方 法，通过亲本、Ｆ 全雌和全雄基因池筛选，从６９９对ＳＳＲ引物组合中获得稳定的多态性引物组合２对，即 ＣＳＷＣＴ２５和ＳＳＲ１８９５６；经回收、测序，特异片段全长分别为３３１ ｂｐ和１４５ ｂｐ，与黄瓜全雌性基因的连锁距离分别 为７．７ ｃＭ和６．８ ｃＭ，均可用于黄瓜全雌系品种的辅助选育． 关键词 黄瓜；雌性系 分子标记 中图分类号Ｓ ６４２．２ 文献标志码Ａ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒ ｌｉｎｋｅｄ ｔｏ ｇｙｎｏｅｃｉｏｕｓ ｌｏｃｉ ｉｎ ｃｕｃｕｍｂｅｒ（Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ Ｌ．）．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ａｇｒｉｃ．＆Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．），２０１３，３９（３）：２９１—２９８ ＺＨＯＵ Ｓｈｅｎｇｊｕｎ ，ＺＨＡＮＧ Ｐｅｎｇ，ＺＨＵ Ｙｕｑｉａｎｇ，ＣＨＥＮ Ｘｉ￣ｕａｎ，ＣＨＥＮ Ｌｉｐｉｎｇ（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ ３１ ００２１，Ｃｈｉｎａ） Ｓｕｍｍａｒｙ Ｇｙｎｏｅｃｙ ｐｌａｙｓ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｃｕｃｕｍｂｅｒ（Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ Ｌ．）ｈｅｔｅｒｏｓｉｓ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍａｒｋｅｒｓ １ｉｎｋｅｄ ｔｏ ｔｈｉｓ ｃｈａｒａｃｔｅｒ ｗｉｌｌ ｆａｃｉｌｉｔａｔｅ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｇｙｎｏｅｃｉｏｕｓ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｌｉｎｅ ｉｎ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｐｒｏｇｒａｍ．Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ ｗｉｔｈ ｇｙｎｏｅｃｉｏｕｓ ｌｉｎｅ ｈａｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｉｎ ｃｏｍｐｌｉｃａｔｅｄ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ ｏｖｅｒ ｓｅｖｅｒａｌ ｙｅａｒｓ，ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｌｏｎｇ ｐｅｒｉｏｄ，ｔｉｍｅ ａｎｄ ｌａｂｏｒ ｃｏｎｓｕｍｉｎｇ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒｓ ｏｆｆｅｒ ａ ｆａｓｔｅｒ ａｎｄ ｍｏｒｅ ａｃｃｕｒａｔｅ ｗａｙ ｆｏｒ ｂｒｅｅｄｉｎｇ，ａｓ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｃａｎ ｂｅ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｒａｔｈｅｒ ｔｈａｎ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ．Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒｓ ｆｏｒ ｉｎｄｉｒｅｃｔ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ａｇｒｏｎｏｍｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ，ｏｒ ｍａｒｋｅｒ—ａｓｓｉｓｔｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ（ＭＡＳ）ｃａｎ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｆ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ｂｒｅｅｄｉｎｇ．Ｍａｎｙ ｓｔｕｄｉｅｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ａ ｌｏｔ ｏｆ ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ，ｗｈｉｃｈ ｈａｄ ｇｒｅａｔｌｙ ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｄ ＭＡＳ ｉｎ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｂｒｅｅｄｉｎｇ．ＮＯＷ ｓｏｍｅ ｓｔｕｄｉｅｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｓｏｍｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｗｅｒｅ ｃｏｎｎｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｇｙｎｏｅｃｉｏｕｓ ｇｅｎｅ ｂｕｔ ｔｈｅ ｄｉｓｔａｎｃｅｓ ｗｅｒｅ ｎｏｔ ｃｏｍｐａｃｔ，ＳＯ ｆｅｗ ｗｅｒｅ ａｖａｉｌａｂｌｙ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ ｂｒｅｅｄｉｎｇ． Ｔｈｅ ａｉｍ ｏｆ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｗａｓ ｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｇｙｎｏｅｃｙ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｇｙｎｏｅｃｉｏｕｓ ｇｅｎｅ ｕｓｉｎｇ ｇｙｎｏｅｃｉｏｕｓ ｌｉｎｅ，ｍｏｎｏｅｃｉｏｕｓ ｌｉｎｅ，ａｎｄ ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒ． Ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｇｙｎｏｅｃｉｏｕｓ ｗａｓ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａ ｇｙｎｏｅｃｉｏｕｓ ｌｉｎｅ ２４０—１—２—２—３—１， 基金项目：国家科技攻关资助项目（２Ｏ１２ＡＡ１ｏｏ１ｏ３ＯＯ６）；浙江省科技计划资助项目（２ｏ１１ｃｏ２ｏｏ１）；杭州市科技计划资助项目（２ＯｌｌＯ３３２ＨＯ８） 通信作者（Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ）：周胜军，Ｅ—ｍａｉｌ：ｚｓｊ６８６９＠１６３．ｃｏｒｎ 收稿日期（Ｒｅｃｅｉｖｅｄ）：２０１２—１１—１４；接受日期（Ａｃｃｅｐｔｅｄ）：２０１３—０１—３０；网络出版日期（Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｏｎｌｉｎｅ）：２０１３—０５—１５ ＵＲＬ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３３．１２４７．Ｓ ２０１３０５Ｉ５．１６２３．００７．ｈｔｍｌ 浙江史学学报（农业与生命科学版） 第３ ９卷 ｍｏｎｏｅｃｉｏｕｓ ｌｉｎｅ ３一Ｓ一１—３—２—１—１—１—１—２ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ Ｆ１，Ｆ２，ＢＣ１ Ｐ１，ＢＣ１ Ｐ２ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ｓｔｕｄｙ． Ｔｏｔａｌ ＤＮＡ ｏｆ ｐａｒｅｎｔｓ ａｎｄ Ｆ２ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｉｅｄ １ｅａｒ ｔｉｓｓｕｅ ｂｙ ｔｈｅ ＣＴＡＢ ｍｅｔｈｏｄ．ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｗｉｔｈ ｇｙｎｏｅｃｉｏｕｓ ｌｉｎｅ ２４０一ｌ一２—２—３一ｌ，ｍｏｎｏｅｃｉｏｕｓ ｌｉｎｅ ３—５～１—３—２—１—１—１—１—２，Ｆ２，ａｎｄ ６９９ ｐａｉｒｓ ｏｆ ＳＳＲ ｐｒｉｍｅｒｓ．ＳＳＲ ａｎａｌｙｓｉｓ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｒｉｍｅｒｓ．ＰＣＲ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｉｎ ２０ ｔ＊Ｉ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ２ Ｌ ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ（２Ｏ ｎｇ），１０ ｐｍｏｌ／￣Ｌ ｐｒｉｍｅｒｓ ０．４ Ｌ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，２．５ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｍｇ ２ Ｉ ，２ ｍｍｏｌ／Ｌ ｄＮＴＰ １ Ｌ，５ Ｕ／／，Ｌ Ｔａｑ ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｅｎｚｙｍｅ ０．１ Ｌ，１０×ｂｕｆｆｅｒ ２ Ｌ ａｎｄ ｄｏｕｂｌｅ ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ ｗａｔｅｒ．Ｔｈｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｆｉｌｅｓ ｗｅｒｅ ５ ｍｉｎ ａｔ ９４℃，ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ３５ ｃｙｃｌｅｓ ｏｆ ３０ ｓ ａｔ ９４℃；１ ｒａｉｎ ａｔ ５５℃．１ ｒａｉｎ ａｔ ７２℃： ｔｈｅｎ １０ ｍｉｎ ａｔ ７２℃．Ａｆｔｅｒ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｔｈｅ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｗｅｒｅ ｍｉｘｅｄ ｗｉｔｈ ｌｏａｄｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ（２．５ ｍｇ／ｍＩ ｂｒｏｍｏｐｈｅｎｏｌ ｂｌｕｅ，２．５ ｍｇ／ｍＩ ｄｉｐｈｅｎｙｌａｍｉｎｅ ｂｌｕｅ，１０ ｍｍｏｌ／Ｌ ＥＤＴＡ，９５ （ ）ｆｏｒｍａｍｉｄｅ），ｄｅｎａｔｕｒｅｄ ｆｏｒ ５ ｍｉｎ ａｔ ９４℃ａｎｄ ｐｕｔ ｏｎ ｉｃｅ ｆｏｒ ５ ｍｉｎ．Ｔｈｅ ｄｅｎａｔｕｒｅｄ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｗｅｒｅ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｏｎ ６ （ Ｖ）ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇ ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｇｅｌ ａｔ １ ００ Ｗ ｐｏｗｅｒ ａｎｄ ｖｉｓｕａｌｉｚｅｄ ｂｙ ｓｉｌｖｅｒ ｓｔｒａｉｎｉｎｇ．Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｏｆ ｐｒｉｍｅｒｓ ｗｅｒｅ ｃｌｏｎｅｄ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｈｃｅｄ．Ｌｉｎｋａｇｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｕｓｅｄ ｔｈｅ ｓｏｆｔｗａｒｅ ｏｆ Ｍａｐｍａｋｅｒ Ｖ３．０． Ｄｕｒｉｎｇ ａｎａｌｙｓｉｎｇ ｔｈｅ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｒａｔｅ ｏｆ Ｆ１ ａｎｄ Ｆｚ，ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｇｙｎｏｅｃｙ ｉｎ ２４０一ｌ一２—２—３—１ ｗａｓ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｂｙ ｏｌｉｇｏｇｅｎｅ ｗｉｔｈ ｓｏｍｅ ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ ｇｅｎｅｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ．Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ ｏｆ ｇｙｎｏｅｃｙ ｗａｓ ａｃｃｏｒｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ａｄｄｉｔｉｖｅ－ ｄｏｍｉｎａｎｔ－ｅｐｉｓｔａｔｉｃ ｍｏｄｅ１．Ｆｒｏｍ ６９９ ｐａｉｒｓ ｏｆ ＳＳＲ ｐｒｉｍｅｒ，ｔｗｏ ｐａｉｒ ｏｆ ｓｔａｂｌｅ ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ（ＣＳＷＣＴ２５ ａｎｄ ＳＳＲ１８９５６），３３１ ｂｐ ａｎｄ １４５ ｂｐ ｉｎ ｂａｎｄｓ ｓｉｚｅ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｄｕｒｉｎｇ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ ｔｗｏ ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ ｃｌｏｎｅｄ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ，ａｎｄ ｌｉｎｋａｇｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｉｔｓ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｔｈｅ ｇｙｎｏｅｃｉｏｕｓ ｌｏｃｉ ｗａｓ ７．７ ｃＭ ａｎｄ ６．８ ｃＭ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｗｏ ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ ａｒｅ ｔｉｇｈｔｌｙ １ｉｎｋｅｄ ｔｏ ｇｙｎｏｅｃｉｏｕｓ ｌｏｃｉ ｏｎ ｔｈｅ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ６ Ｉｎ ｓｕｍ，ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ ｏｆ ｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｙｎｏｅｃｉｏｕｓ ｇｅｎｅ ｉｎ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｒａｉｔｓ ｉｎ ｃｒｏｓｓｅｓ ｗｉｌｌ ｂｅ ｈｅｌｐｆｕｌ ｔｏ ｔｈｅ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｍｏｒｅ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｓｃｈｅｍｅｓ ｔｏ ｄｅｖｅｌｏｐ ｇｙｎｏｅｃｉｏｕｓ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｇｙｎｏｅｃｉｏｕｓ ｌｉｎｅｓ ｉｓ ｓｔｉｌｌ ｓｌｏｗ ｂｅｃａｕｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｍｐｌｅｘ ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ ｏｆ ｔｈｉｓ ｃｈａｒａｃｔｅｒ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｇｙｎｏｅｃｉｏｕｓ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｃａｎ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅ ｔｏ ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ ｇｙｎｏｅｅｉｏｕｓ ｌｉｎｅ．Ｔｗｏ ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｄ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ ｆｏｒ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒ－ ａｓｓｉｓｔｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｐｒｏｇｒａｍｓ ｔｏ ｄｅｖｅｌｏｐ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｇｙｎｏｅｃｉｏｕｓ ｌｉｎｅ ｂｒｅｅｄｉｎｇ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ ｃｕｃｕｍｂｅｒ（Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ Ｌ．）；ｇｙｎｏｅｃｉｏｕｓ；ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒ 黄瓜（Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ Ｌ．）是我国主要蔬菜作物 育种研究具有重要的理论与实践意义． 之一，在全国各地均有广泛栽培．黄瓜植株性型多样， 目前，通过对黄瓜性别决定连锁基因的分子标 主要分为雌雄异花同株（ｍｏｎｏｅｃｉｏｕｓ）、全雌株 记研究，已获得了与全雌性Ｆ位点紧密连锁的ＡＣＣ （ｇｙｎｏｅｃｉｏｕｓ）、两性株（ｈｅｒｍａｐｈｒｏｄｉｔｉｃ）、雄花两性花同 合酶基因（ＣＳ－ＡＣＳ１基因）片段标记口 ；与Ｍ基因 株（ａｎｄｒｏｍｏｎｏｅｃｉｏｕｓ）、雄花、雌花及两性花同株（ｔｒｉ— 连锁的ＳＲＡＰ标记ＭＥ２３ＳＡ４（１７．８ ｃＭ）｝＿２］、ＳＳＲ标 ｍｏｎｏｅｃｉｏｕｓ）等．利用黄瓜全雌品系制种可以免去人工 记ＳＳＲ２３４８７（０．２８ ｃＭ）、ＳＳＲ１９９１４（３．２Ｏ ｃＭ）和 或化学去雄工序，极大地简化杂交种的配制工作，并 ＳＣＡＲ标记ＳＣＡＲ１２３（０．９４ ｃＭ）口 ；与Ｍ基因共分 且制成的１代杂种纯度很高，是黄瓜优势育种的首选 离ＳＮＰ标记ＳＮ１＿４］，与强雌基因连锁的ＣＡＰＳ标记 途径之一，而黄瓜的雌花比例也是影响产量的决定性 Ｃ—ＭＴ７００［５ ；与全雌性基因连锁的ＲＡＰＤ［６ ］、 因素．因此，选育全雌性品种是黄瓜育种研究的主要 ＡＦＬＰ［ 、ＳＲＡＰ、ＳＣＡＲ［ 、ＩＳＳＲ标记 ］及特异片 目标之～． 段［１ ｎ 等．但是能用于黄瓜全雌性辅助育种实践的 长期以来，黄瓜雌性系的选育都是依靠田间开 分子标记仍不多见． 花习性给予分级鉴别．这种表型鉴定方法存在耗费 ＳＳＲ标记技术现已普遍地用于图谱的构 大、准确率低、周期长并受环境因素和主观因素影响 建ｌ＿】 、性状连锁标记的筛选口 、亲缘关系的分 等缺点．分子标记的出现为黄瓜性型鉴定提供了新 析＿ｌ 。。等工作．本研究以全雌品系２４０—１—２—２～ 的技术手段，分子标记辅助选择（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒ－ ３—１自交系为供体亲本，弱雌品系３—５—１—３—２— ａｓｓｉｓｔｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ＭＡＳ）是结合现代分子生物学与 １—１—１—１—２自交系为受体亲本杂交，通过对杂交 传统遗传育种学，借助分子标记对育种材料从ＤＮＡ 后代进行自交，构建具有不同基因型的分离群体；应 水平上进行选择，从而快速选择得到具有目的基因 用ＢＳＡ法获得与黄瓜全雌性紧密连锁的ＳＳＲ分子标 后代的方法，简单易行，效率高，能够实现苗期的性 记，并将特异片段进行回收测序，经验证，获得的ＳＳＲ 型鉴定，极大地缩短传统育种的进程，对黄瓜全雌性 标记可用于标记辅助全雌性种质资源的发掘、鉴定与 第３期 周胜军，等：与黄瓜全雌性基因连锁的ＳＳＲ分子标记 杂交新组合的选择，本研究的开展为黄瓜全雌性品种 的选育与利用提供了理论依据． １ 材料与方法 １．１植物材料 供试黄瓜材料由浙江省农业科学院蔬菜研究所 提供，种植于浙江省农业科学院杨渡科研基地温室 中．以黄瓜全雌品系２４０—１—２—２—３—１自交系作 为母本，弱雌品系３—５～１—３—２—１—１—１—１—２ 自交系作为父本，构建Ｐ 、Ｐ 、Ｆ１、Ｆ 、ＢＣ Ｐ 、ＢＣ Ｐ 等６世代材料，分析黄瓜全雌性遗传规律．利用Ｆ。 分离群体获得与黄瓜全雌性基因相关的分子标记． １．２黄瓜性别分化遗传分析 幂Ｕ用２４０—１—２—２—３—１和３—５—１—３～２—１— １—１—１—２的Ｆ 、Ｆ２、ＢＣ。Ｐ 、ＢＧＰ 做性型遗传分析． 植株开花后分别调查统计单株的第１～２Ｏ节位的雌 花、雄花总数，统计完成的花以毛笔涂抹红墨水区分， 计算雌花百分比．全株上下均为雌花，无１朵雄花为 全雌性；雌花百分比大于或等于９Ｏ 为强雌性；小于 或等于１Ｏ％的为弱雌性． 以基因型为抽样单位，采用Ｊａｃｋｋｎｉｆｅ重复抽样 技术计算各项遗传参数的估计值和预测值的标准 误，并进行遗传参数显著性检验．用ＧＥＮＶＡＲＩＲ 计算软件，采用最小范数二阶无偏估算法 ［ＭＩＮＱＵＥ（１）法］估算遗传模型中的各项方差分量 及其对表现型方差的比率＿２ ．采用调整无偏预测法 （ａｄｊｕｓｔｅｄ ｕｎｂｉａｓｅｄ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ，ＡＵＰ）预测遗传效应 值．以加性一显性模型（ＡＤ模型）和加性一显性一上位 性模型（ＡＤＡＡ模型）分别检验遗传模型． １．３基因组ＤＮＡ的提取和ＤＮＡ池的构建 采用ＣＴＡＢ法Ｌ２ 提取基因组ＤＮＡ．应用ＢＳＡ 法［２３ｊ，各取３０株全雌和全雄单株ＤＮＡ等量混合，构 建成全雌和全雄基因池用于ＳＳＲ多态性引物的筛选． １．４ ＳＳＲ分子标记分析及特异片段的测序 利用亲本、全雌和全雄基因池，在６９９对ＳＳＲ 引物中筛选特异引物．ＰＣＲ扩增反应总体系为２０ ｔ＊Ｌ，成分为：黄瓜基因组ＤＮＡ ２０ ｎｇ，１０ ｐｍｏｌ／ｔ，Ｌ 弓【物各０．４ Ｌ，２．５ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｍｇ。 ２ Ｌ，２ ｍｍｏｌ／Ｌ ｄＮＴＰ １ Ｌ，５ Ｕ／ｔ￣Ｌ Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶０．１ Ｌ， １０×缓冲液２ Ｌ，加无菌重蒸水补齐至２Ｏ Ｌ．ＰＣＲ 反应扩增程序为：９４℃预变性５ ｍｉｎ，９４℃变性 ３０ Ｓ，５５℃退火１ ｍｉｎ，７２℃延伸１ ｍｉｎ，３５个循环， ７２℃延伸１０ ｍｉｎ．选择性扩增产物在６ 变性聚丙 烯酰胺凝胶中电泳分离，在恒定１００ Ｗ功率下电泳 至溴酚蓝到达凝胶另一端，采用银染法［２ ］染色． 将多态性片段用刀片从变性聚丙烯酰胺凝胶上 切下，用ＡｘｙＰｒｅｐ ＤＮＡ凝胶回收试剂盒回收纯化， 用ｐＧＥＭ２Ｔ ｅａｓｙ载体连接，单菌落质粒提取后，经 酶切鉴定，由上海生工生物技术服务有限公司测序． １．５连锁分析 ． 分子标记的记录采用Ｍａｐｍａｒｋｅｒ Ｖ３．０软件口 记录方法．对于ＳＳＲ共显性标记，父本的纯合带型记 为Ａ，母本的纯合带型记为Ｂ，两亲本的杂合带型记 为Ｈ，数据缺失记为“一”．以Ｍａｐｍａｒｋｅｒ Ｖ３．０软件对 Ｆ２分离群体单株的标记和性型表现数据进行连锁分 析，利用Ｋｏｓａｍｂｉ函数Ｌ２ 将重组率转化为遗传图 距，ｃＭ． ２ 结果与分析 婷 嘲 ０ ．Ｉ ∞＿｝ ∞ ｐ —∞ ∞踟∞∞２．１黄瓜性别分化遗传分析 雌性系Ｆ２分离群体次数分布图如图１所示．从 图中可以看出，黄瓜性别表达由寡基因控制，并受到 一些背景基因的修饰．根据Ｐ 、Ｐ２、Ｆ。、Ｆ２、ＢＣ Ｐ 、 ＢＣ Ｐ２等６世代材料田问调查数据分析，黄瓜雌性系 相关基因遗传模型符合加性一显性～上位性遗传模型． １Ｏ ２０ ３０ ４Ｏ ５Ｏ ６０ ７０ ８０ ９Ｏ １００ 雌花百分比 Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ｆｅｍａｌ ｆｌｏｗｅｒ（％） 图１雌性系分离群体数量分布图 Ｆｉｇ．１ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｍａｐ ｏｆ Ｆｚ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ｏｆ ｇｙｎｏｅｃｉｏｕｓ ｐｌａｎｔｓ ２．２ ＳＳＲ引物的筛选 选用６９９对黄瓜ＳＳＲ引物，对２４０—１—２—２— ３—１和３—５—１—３～２—１—１—１—１～２自交系进行 多态性分析．利用亲本对ＳＳＲ引物进行筛选，其中 ７５对ＳＳＲ引物在两亲本间表现出多态性（图２），多 态性比率为１Ｏ．７ ． 利用全雌和全雄基因池对在两亲本问表现多态 —西吕 加０ 第３期 周胜军，等：与黄瓜全雌性基因连锁的ＳＳＲ分子标记 ２９７ ＲｅｆｅＦｅｎｃｅｓ： ［１］Ｔｒｅｂｉｔｓｈ Ｊ，Ｓｔａｕｂ Ｊ Ｅ，ＯＮｅｌｌ Ｓ Ｄ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ １一ａｍｉｎｏｃｙｃｌｏｐｒｏｐａｎｅ一１一ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｇｅｎｅ ｌｉｎｋｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｆｅｍａｌｅ（Ｆ）ｌｏｃｕｓ ｔｈａｔ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｆｅｍａｌｅ ｓｅｘ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｃｕｃｕｍｂｅｒ．Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，１９９７，１ １３：９８７—９９５． ［２］邓思立，潘俊松，何欢乐，等．黄瓜Ｍ基因连锁的ＳＲＡＰ分子 标记．上海交通大学学报：农业科学版，２００６，２４（３）： ２４０—２４４． Ｄｅｎｇ Ｓ Ｉ ，Ｐａｎ Ｊ Ｓ，Ｈｅ Ｈ Ｌ，ｅｔ ａ１．ＳＲＡＰ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒ ｌｉｎｋｅｄ ｔｏ Ｍ ｇｅｎｅ ｉｎ ｃｕｃｕｍｂｅｒ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｊｉａｏｔｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００６，２４（３）： ２４０—２４４．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｉｔｈ Ｅｎｇｌｉｓｈ ａｂｓｔｒａｃｔ） ［３］ 时秋香，刘世强，李征，等．与黄瓜Ｍ基因连锁的三个共显性 标记．园艺学报，２００９，３６（５）：７３７—７４２． Ｓｈｉ Ｑ Ｘ，Ｌｉｕ Ｓ Ｑ，Ｌｉ Ｚ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｒｅｅ ｃｏ—ｄｏｍｉｎａｎｔ ｍａｒｋｅｒｓ ｌｉｎｋｅｄ ｔｏ Ｍ ｇｅｎｅ ｉｎ Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ．Ａｃｔａ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｅ Ｓｉｎｉｃａ，２００９，３６（５）：７３７—７４２．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｉｔｈ Ｅｎｇｌｉｓｈ ａｂｓｔｒａｃｔ） ［４］刘世强．黄瓜性别决定基因Ｍ的精细定位及转录表达谱分 析．南京：南京农业大学．２００８：５６—８７． Ｌｉｕ Ｓ Ｑ．Ｆｉｎｅ－ｍａｐｐｉｎｇ ａｎｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ ｆｏｒ ｓｅｘ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｉｎ ｃｕｃｕｍｂｅｒ． Ｎａｎｊｉｎｇ： Ｎａｎｊｉｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．２００８：５６—８７．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｉｔｈ Ｅｎｇｌｉｓｈ ａｂｓｔｒａｃｔ） ［５］ 向太和，王利琳，庞基良，等．不同性别类型黄瓜ＡＣＣ合酶基 因的单核苷酸多态性标记和酶切扩增长度多态性标记．生物 化学与生物物理进展，２００６，３３（４）：３６２—３６７． Ｘｉａｎｇ Ｔ Ｈ，Ｗａｎｇ Ｌ Ｌ，Ｐａｎｇ Ｊ Ｌ，ｅｔａ１．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ＳＮＰ ｍａｒｋｅｒ ａｎｄ ＣＡＰＳ ｍａｒｋｅｒ ｌｉｎｋｅｄ ｔｏ ＡＣＣ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｇｅｎｅ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｅｘｕａｌ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ ｏｆ ｃｕｃｕｍｂｅｒ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ。２００６，３３（４）：３６２—３６７．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｉｔｈ Ｅｎｇｌｉｓｈ ａｂｓｔｒａｃｔ） ［６］ 陈劲枫，娄群峰，余纪柱，等．黄瓜性别基因连锁的分子标记 筛选．上海农业学报，２００３，１９（４）：１１—１４ Ｃｈｅｎ Ｊ Ｆ，Ｌｏｕ Ｑ Ｆ，Ｙｕ Ｊ Ｚ，ｅｔ ａ１．Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ ＲＡＰＤ ｍａｒｋｅｒ ｌｉｎｋｅｄ ｔｏ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｓｅｘ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｇｅｎｅ．Ａ ｃｔａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅ Ｓｈａｎｇｈａｉ，２００３，１９（４）：ｌ１～１４．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｉｔｈ Ｅｎｇｌｉｓｈ ａｂｓｔｒａｃｔ） ［７］周晓艳．黄瓜全雌性相关的ＲＡＰＤ标记及ＡＣＣ合酶基因的 克隆．山东曲阜：曲阜师范大学．２００７：３９—５０． Ｚｈｏｕ Ｘ Ｙ．ＲＡＰＤ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒ ｌｉｎｋｅｄ ｔｏ ｇｙｎｏｅｃｉｏｕｓ ｌｏｃｉ ａｎｄ ＡＣＣ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｇｅｎｅ ｃｌｏｎｅｄ ｉｎ ｃｕｃｕｍｂｅｒ． Ｑｕｆｕ， Ｓｈａｎｄｏｎｇ：Ｑｕｆｕ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．２００７：３９—５０．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｉｔｈ Ｅｎｇｌｉｓｈ ａｂｓｔｒａｃｔ） ［８］娄群峰，陈劲枫，Ｍｏｌｌｙ Ｊ，等．黄瓜全雌性基因连锁的ＡＦＬＰ 和ＳＣＡＲ分子标记．园艺学报，２００５，３２（２）：２５６—２６１． Ｌｏｕ Ｑ Ｆ，Ｃｈｅｎ Ｊ Ｆ，Ｍｏｌｌｙ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＡＦＬＰ ａｎｄ ＳＣＡＲ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒｓ ｌｉｎｋｅｄ ｔｏ ｇｙｎｏｅｃｉｏｕｓ ｌｏｃｉ ｉｎ Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ Ｌ．Ａｃｔａ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｅ Ｓｉｎｉｃａ，２００５，３２（２）： ２５６—２６１．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｉｔｈ Ｅｎｇｌｉｓｈ ａｂｓｔｒａｃｔ） ［９］ 毕喜红．黄瓜雌性系控制基因的ＳＲＡＰ和ＳＣＡＲ分子标记． 重庆：西南大学．２００６：３０—５６． Ｂｉ Ｘ Ｈ．ＳＲＡＰ ａｎｄ ＳＣＡＲ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒ ｌｉｎｋｅｄ ｔｏ ｇｙｎｏｅｃｉｏｕｓ ｌｏｃｉ ｉｎ ｃｕｃｕｍｂｅｒ． Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ： Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．２００６：３０—５６．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｉｔｈ Ｅｎｇｌｉｓｈ ａｂｓｔｒａｃｔ） ＥｌＯ］刘晓虹，陈惠明，许亮，等．黄瓜性别决定基因相关的分子标 记．湖南农业大学学报：自然科学版，２００８，３４（４）：４０３—４０８． Ｌｉｕ Ｘ Ｈ，Ｃｈｅｎ Ｈ Ｍ，Ｘｕ Ｌ，ｅｔａ１．Ｏｎ ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒｓ ｏｆ ｓｅｘ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｃｕｃｕｍｂｅｒ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｕｎａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ：Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２００８，３４（４）： ４０３—４０８．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｉｔｈ Ｅｎｇｌｉｓｈ ａｂｓｔｒａｃｔ） ［１１］ 程立宝，秦智伟，李淑艳，等．与黄瓜雌性性状连锁的ｃ￣ａｃｓｌｇ 基因特异片段克隆与鉴定．中国农业科学，２００６，３９（１２）： ２５４５—２５５０． Ｃｈｅｎｇ Ｌ Ｂ，Ｑｉｎ Ｚ Ｗ，Ｌｉ Ｓ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｐｅｃｉａｌ ｃ￣ａｃｓｌ ｇ ｇｅｎｅ—ｌｉｎｋｅｄ ｔｏ ｇｙｎｏｅｃｉｏｕｓ ｉｎ ｃｕｃｕｍｂｅｒ．ＳｃｉｅｎｔｉａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａ Ｓｉｎｉｃａ，２００６，３９（１２）：２５４５～ ２５５０．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｉｔｈ Ｅｎｇｌｉｓｈ ａｂｓｔｒａｃｔ） ［１ ２］王瑞，林毓娥，黄河勋，等．华南型黄瓜雌性性状分子标记初 报．园艺学报，２００９，３６（增刊）：１９９８． Ｗａｎｇ Ｒ，Ｌｉｎ Ｙ Ｅ，Ｈｕａｎｇ Ｈ Ｘ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒ ｌｉｎｋｅｄ ｔｏ ｇｙｎｏｅｃｉｏｕｓ ｌｏｃｉ ｉｎ Ｈｕａｎａｎ ｃｕｃｕｍｂｅｒ．Ａｃｔａ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｅ Ｓｉｎｉｃａ，２００９，３６（Ｓｕｐｐ１）：１９９８．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｉｔｈ Ｅｎｇｌｉｓｈ ａｂｓｔｒａｃｔ） ［１３］ 张西露，刘峰，戴雄泽，等．黄瓜性别控制基因ＣｓＡＣＳ１Ｇ的分 子标记及其快速检测湖南农业大学学报：自然科学版， ２０１０，３６（５）：５１２—５１５． Ｚｈａｎｇ Ｘ Ｌ，Ｌｉｕ Ｆ，Ｄａｉ Ｘ Ｚ，ｅｔ ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＣｓＡＣＳ１Ｇ ｇｅｎｅ ＤＮＡ ｍａｒｋｅｒｓ ａｎｄ ＤＮＡ ｒａｐｉｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｃｕｃｕｍｂｅｒ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｕｎａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ： Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１０，３６（５）：５１２—５１５．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｉｔｈ Ｅｎｇｌｉｓｈ ａｂｓｔｒａｃｔ） ［－１４］金梦阳，刘列钊，付福友，等．甘蓝型油菜ＳＲＡＰ、ＳＳＲ、ＡＦＬＰ 和ＴＲＡＰ标记遗传图谱构建．分子植物育种，２００６，４（７）： ５２０—５２６． Ｊｉｎ Ｍ Ｙ，Ｌｉｕ Ｌ Ｚ，Ｆｕ Ｆ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｇｅｎｅｔｉｃ ｌｉｎｋａｇｅ ｍａｐ ｉｎ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ＳＲＡＰ，ＳＳＲ，ＡＦＬＰ ａｎｄ ＴＲＡＰ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ，２００６，４（７）：５２０— ５２６．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｉｔｈ Ｅｎｇｌｉｓｈ ａｂｓｔｒａｃｔ） ［１ ５］马海财，马雄，柳剑丽，等．利用ＳＳＲ分子标记构建甜瓜遗传 图谱．福建农林大学学报：自然科学版，２０１０，１（６）：４７—５２． Ｍａ Ｈ Ｃ，Ｍａ Ｘ，Ｌｉｕ Ｊ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｇｅｎｅｔｉｃ ｍａｐ ｆｏｒ ｍｅｌｏｎ ｗｉｔｈ ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｕｊｉｏｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０１０，１（６）：４７—５２．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｉｔｈ Ｅｎｇｌｉｓｈ ａｂｓｔｒａｃｔ） ［１６］杨燕宇．甘蓝型油菜ＳＳＲ分子标记图谱构建和油酸含量 ＱＴＬ定位．长沙：湖南农业大学．２０１１：３７—４９． Ｙａｎｇ Ｙ Ｙ．Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＳＳＲ—ｂａｓｅｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｍａｐ ａｎｄ ＱＴＬ ｍａｐｐｉｎｇ ｆｏｒ ｏｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｒａｐｅｓｅｅｄ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ Ｌ．）．Ｃｈａｎｇｓｈａ：Ｈｕｎａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．２０１１：３７— ４９．ｆ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｉｔｈ Ｅｎｇｌｉｓｈ ａｂｓｔｒａｃｔ） ［１７］袁有禄，张天真，郭旺珍，等．棉花高品质纤维性状ＱＴＬｓ的 分子标记筛选及其定位．遗传学报，２００１，１２（１１）：１１５１— ２９８ 浙江大学学报（农业与生命科学版） 第３ ９卷 １１６１． Ｙｕａｎ Ｙ Ｌ，Ｚｈａｎｇ Ｔ Ｚ，Ｇｕｏ Ｗ Ｚ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔａｇｇｉｎｇ ａｎｄ ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ ＱＴＬｓ ｆｏｒ ｓｕｐｅｒ ｑｕａｌｉｔｙ ｆｉｂｅｒ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｉｎ ｕｐｌａｎｄ ｃｏｔｔｏｎ．Ａｅｔａ Ｇｅｎｅｔｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ，２００１，１２（１１）：１１５１— １１６１．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｉｔｈ Ｅｎｇｌｉｓｈ ａｂｓｔｒａｃｔ） ［１８］ 王海莲，秦岭，管延安，等 高粱ＳＳＲ技术体系的优化及分子 连锁图谱的构建［Ｊ／０Ｌ］．分子植物育种：网络版，２０１１，９： １３５１—１３５８．ｈｔｔｐ：／／ｍｐｂ．ｃｈｉｎｅｓｅ．ｓ０ｐｈｉａｐｕｂｌｉｓｈｅｒ．ｃｏｒｎ． Ｗａｎｇ Ｈ Ｌ，Ｑｉｎ Ｌ，Ｇｕａｎ Ｙ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＳＲ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｓｙｓｔｅｍ ａｎｄ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｇｅｎｅｔｉｃ ｍａｐ ｏｆ ｓｏｒｇｈｕｍ［Ｊ／ＯＬ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ：Ｏｎｌｉｎｅ． ２０１１，９：１３５１—１３５８．ｈｔｔｐ：／／ｍｐｈ．ｃｈｉｎｅｓｅ．ｓｏｐｈｉａｐｕｂｌｉｓｈｅｒ． ｅｏｍ（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｉｔｈ Ｅｎｇｌｉｓｈ ａｂｓｔｒａｃｔ） ［１９］ 吴晓雷，贺超英，陈受宜，等．用ＳＳＲ分子标记研究大豆属种 间亲缘进化关系．遗传学报，２０１１，４（８）：３５９—３６６． Ｗｕ Ｘ Ｉ ，Ｈｅ Ｃ Ｙ，Ｃｈｅｎ Ｓ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｅｓ ｉｎ ｇｅｎｕｓ ｇｌｙｅｉｎｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ．Ａｃｔａ Ｇｅｎｅｔｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ，２０１１，４（８）：３５９—３６６．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｉｔｈ Ｅｎｇｌｉｓｈ ａｂｓｔｒａｃｔ） ［２０１ 黄玮，杨敏，秦保平，等．利用ＳＳＲ分子标记分析彩色小麦的 亲缘关系与遗传多样性．作物学报，２０１２，３８（６）：１１３５— １１３９． Ｈｕａｎｇ Ｗ，Ｙａｎｇ Ｍ，Ｑｉｎ Ｂ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｃｏｌｏｒｅｄ—ｇｒａｉｎ ｗｈｅａｔ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ．Ａｃｔａ Ａｇｒｏｎｏｍｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ，２０１２，３８（６）：１１３５一 ｌ１３９．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｉｔｈ Ｅｎｇｌｉｓｈ ａｂｓｔｒａｃｔ） ［２１］ Ｒａｏ Ｃ Ｒ．Ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃｅ ａｎｄ ｃｏｖａｒｉａｎｃｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ＭＩＮＱＵＥ ｔｈｅｏｒｙ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ，１９７１，１ （３）：２５７—２７５． ［２２］ 王宏建，吴越，谷维，等．改进的ＣＴＡＢ法提取黄瓜ＤＮＡ．黑 龙江农业科学，２００６（５）：１２４—１２５． Ｗａｎｇ Ｈ Ｊ，Ｗｕ Ｙ，Ｇｕ Ｗ，ｅｔ ａ１．Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡ ｆｒｏｍ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｂｙ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ＣＴＡＢ ｍｅｔｈｏｄ．Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２００６（５）：１２４—１２５．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｉｔｈ Ｅｎｇｌｉｓｈ ａｂｓｔｒａｃｔ） ［２３］ Ｍｉｃｈｅｌｎｏｒｅ Ｒ Ｗ．Ｐａｒａｎ Ｉ，Ｋｅｓｓｅｌｉ Ｒ Ｖ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉ０ｎ ｏｆ ｍａｒｋｅｒｓ ｌｉｎｋｅｄ ｔｏ ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ｂｙ ｂｕｌｋｅｄ ｓｅｇｒｅｇａｔｅ ａｎａｌｙｓｉｓ：ａ ｒａｐｉｄ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇｅｎｏｍｉｃ ｒｅｇｉｏｎｓ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｓｅｇｒｅｇａｔｉｎｇ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ． Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆＡｍｅｒｉｃａ，１９９１，８８：９８２８—９８３２． ［２４ｊ 许绍斌，陶玉芬，杨昭庆，等．简单快速的ＤＮＡ银染和胶保存 方法．遗传，２００２，２４（３）：３３５—３３６ Ｘｕ Ｓ Ｂ，Ｔａｏ Ｙ Ｆ，Ｙａｎｇ Ｚ Ｑ．ｅｔ ａ１．Ａ ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ ｒａｐｉｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｓｉｌｖｅｒ ｓｔａｉｎｉｎｇ ａｎｄ ｇｅｌ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ． Ｈｅｒｅｄｉｔａｓ，２００２，２４（３）：３３５—３３６．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｉｔｈ Ｅｎｇｌｉｓｈ ａｂｓｔｒａｃｔ） ［２５］ Ｌａｎｄｅｒ Ｅ Ｓ，Ｇｒｅｅｎ Ｐ，Ａｂｒａｈａｍｓｏｎ Ｊ．Ｍａｐｍａｒｋｅｒ：ａｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｖｅ ｃｏｍｐｕｔｅｒ ｐａｃｋａｇｅ ｆｏｒ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｎｇ ｐｒｉｍａｒｙ ｇｅｎｅｔｉｃ ｌｉｎｋａｇｅ ｍａｐｓ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ ｎａｔｕｒａｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ． Ｇｅｎｏｍｉｃｓ。１９８７，１（２）：１７４—１８１． ［２６］ Ｋｏｓａｍｂｉ Ｄ Ｄ．Ｔｈｅ ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｐ ｄｉｓｔａｎｃｅｓ ｆｒｏｍ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｖａｌｕｅｓ Ａｎｎａｌｓ ｏｙ Ｅｕｇｅｎｉｃｓ．１９４３．１２：１７２～ １７５． ［２７］ Ｍａｌｅｐｓｚｙ Ｓ，Ｎｉｅｍｉｒｏｗｉｃｚ—Ｓｚｃｚｙｔｔ Ｋ．Ｓｅｘ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｉｎ ｃｕｃｕｍｂｅｒ（Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ）ａｓ ａ ｍｏｄｅｌ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９１，８０：３９—４７． ［２８］ 孟繁静．植物花发育的分子生物学．北京：中国农业出版社 ２０００：８６—１Ｏ５． Ｍｅｎｇ Ｆ Ｊ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｆｌｏｗｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｂｅｉｊｉｎｇ：Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｐｒｅｓｓ．２０００：８６— １０５．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［２９３ Ｔｅｒｅｆｅ Ｄ，Ｔａｔｌｉｏｇｌｕ Ｔ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｐａｒｔｉａｌ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ａ ｐｕｔａｔｉｖｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｕｇａｒ ｅｐｉｍｅｒａｓｅ，ｗｈｉｃｈ ｍａｙ ｉｎｖｏｌｖｅ ｉｎ ｓｔａｍｅｎ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｉｎ ｃｕｃｕｍｂｅｒ（Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ Ｉ ．）． 丁 Ｇ Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ．２００５．１ １ ｌ：１ ３００— １３０７． ［３Ｏ］ 陈惠明，卢向阳，刘晓虹，等．两个薪发现的黄瓜性别决定基 因遗传规律的研究．园艺学报，２００５，３２（５）：８９５—８９８． Ｃｈｅｎ Ｈ Ｍ，Ｌｕ Ｘ Ｙ，Ｌｉｕ Ｘ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｔｗｏ ｓｅｘ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ ｉｎ ｃｕｃｕｍｂｅｒ．Ａｃｔａ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｅ Ｓｉｎｉｃａ，２００５，３２（５）：８９５—８９８．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｉｔｈ Ｅｎｇｌｉｓｈ ａｂｓｔｒａｃｔ） ［３１］ 闫立英，娄丽娜，娄群峰，等．全雌黄瓜单性结实性的遗传分 析园艺学报，２００８，３５（１０）：１４４１—１４４６． Ｙａｎ Ｌ Ｙ，Ｌｏｕ Ｉ Ｎ，Ｌｏｕ Ｑ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ ｏｆ ｐａｒｔｈｅｎｏｃａｒｐｙ ｉｎ ｇｙｎｏｅｃｉｏｕｓ ｃｕｃｕｍｂｅｒ．Ａｃｔａ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｅ Ｓｉｎｉｃａ，２００８，３５（１０）：１４４１—１４４６．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｉｔｈ Ｅｎｇｌｉｓｈ ａｂｓｔｒａｃｔ） ［３２］ 石运庆，牟秋焕，，等．ＤＮＡ分子标记及其在作物遗传育 种中的应用．山东科学，２００５，１８（２）：２２—２９． Ｓｈｉ Ｙ Ｑ，Ｍｕ Ｑ Ｈ，Ｌｉ Ｐ，ｅｔ ａ１．ＤＮＡ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｃｒｏｐｓ ｂｒｅｅｄｉｎｇ Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００５， １８（２）：２２—２９．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｗｉｔｈ Ｅｎｇｌｉｓｈ ａｂｓｔｒａｃｔ）
